Kelebihan dan Kekurangan Multiphoton Laser Scanning Microscopy (MLSM)
Mikroskopi pengimbasan laser multifoton ialah kaedah eksperimen berdasarkan teknologi mikroskopi pengimbasan laser, yang menyediakan keupayaan pembahagian optik yang lebih baik untuk pemerhatian tiga dimensi. Kaedah pengujaan pendarfluor berbilang foton menggunakan cahaya merah panjang gelombang panjang atau cahaya inframerah dekat untuk mengumpul imej pendarfluor resolusi tinggi spesimen, yang menyebabkan kerosakan minimum pada spesimen hidup. Oleh itu, ia sesuai untuk pengimejan sel hidup, terutamanya tisu hidup yang tebal seperti hirisan otak, embrio, dan lain-lain. Kajian pengimejan keseluruhan organ atau keseluruhan badan.
Kelebihannya adalah seperti berikut:
1. Gunakan cahaya merah atau cahaya inframerah untuk menguja, dan penyerakan cahaya adalah kecil (penyerakan zarah-zarah kecil adalah berkadar songsang dengan kuasa keempat panjang gelombang).
2. Tiada lubang jarum diperlukan, dan lebih banyak foton berselerak daripada keratan rentas pengimejan boleh dikumpulkan.
3. Lubang jarum tidak dapat membezakan foton bertaburan yang dipancarkan daripada kawasan nyahfokus atau kawasan fokus, dan nisbah isyarat-ke-bunyi bagi pengimejan berbilang foton dalam lapisan dalam adalah baik.
4. Cahaya ultraungu atau boleh dilihat yang digunakan untuk pengujaan foton tunggal mudah diserap dan dilemahkan oleh sampel sebelum pancaran mencapai satah fokus, dan sukar untuk merangsang lapisan dalam.
5. Dari segi pemerhatian mikroskop biologi, pertimbangan pertama adalah untuk tidak merosakkan keadaan aktif organisma itu sendiri dan mengekalkan aliran air, kepekatan ion, oksigen dan nutrien. Dalam kes pemerhatian cahaya, kedua-dua tenaga haba dan foton mesti kekal dalam jumlah penyinaran dan tenaga cahaya yang sel tidak akan rosak.
6. Mikroskopi multifoton juga mempunyai banyak kelebihan. Sebagai contoh, dari segi resolusi tiga dimensi, penembusan kedalaman, kecekapan serakan, cahaya latar belakang, nisbah isyarat-ke-bunyi, kawalan, dll., terdapat ciri-ciri transenden yang tidak ada atau tidak dapat dipadankan oleh mikroskop laser sebelumnya.
Mikroskopi pengimbasan laser confocal berbilang foton telah diperluaskan ke pelbagai bidang penyelidikan dan aplikasi. Ia boleh menjalankan pemerhatian tiga dimensi tanpa merosakkan sampel dalam keadaan semula jadinya, dan boleh meningkatkan resolusi dan nisbah isyarat kepada bunyi sistem. Menggunakan bahan pengujaan berbilang foton Perubahan dalam sifat juga boleh merealisasikan penyimpanan data ketinggian tiga dimensi dan pemesinan mikro tiga dimensi dalam sebarang arah, yang mempunyai nilai aplikasi yang tinggi. Adalah dipercayai bahawa dengan pembangunan selanjutnya mesin, bahan, teknologi laser, dan lain-lain yang berkaitan dengan mikroskop confocal berbilang foton, lebih banyak mikroskopi pengimbasan laser confocal Fotonik akan menerima pembangunan yang lebih besar dan aplikasi yang lebih luas.
Kelemahannya adalah seperti berikut:
1. Ia hanya boleh pendarfluor imej.
2. Jika sampel mengandungi kromofor yang boleh menyerap cahaya pengujaan, seperti pigmen, sampel mungkin rosak oleh haba.
3. Resolusi berkurangan sedikit. Walaupun ia boleh diperbaiki dengan menggunakan lubang konfokal pada masa yang sama, akan ada kehilangan isyarat.
4. Terhad oleh laser ultrafast yang mahal, kos mikroskop pengimbasan multifoton agak tinggi.
