Penggunaan Mikroskopi Pendarfluor Pantulan Dalaman Jumlah Pendarfluor
TIRFM (Total Internal Reflection Fluorescence Microscope), jumlah mikroskop pendarfluor pantulan dalaman, apabila cahaya memasuki medium dengan indeks biasan yang lebih rendah daripada medium dengan indeks biasan yang tinggi, jika sudut kejadian cukup besar, semua cahaya dipantulkan tanpa pembiasan, tetapi dalam Antara muka dua media menghasilkan gelombang evanescent yang boleh merangsang pendarfluor dalam 100nm berhampiran antara muka untuk merealisasikan pemerhatian permukaan objek. Cahaya pengujaan boleh dihantar melalui penerang mikroskop pendarfluor konvensional atau penerang khas, dan sudut kejadian laser boleh dikawal. Kaedah pengujaan medan serta-merta digunakan untuk menghalang cahaya pengujaan daripada memasuki pengesan. Cahaya pengujaan pada antara muka antara kaca dan air menghasilkan dalaman penuh yang dilaksanakan oleh pantulan. Oleh kerana pengecilan eksponen cahaya pengujaan, hanya kawasan sampel yang sangat dekat dengan jumlah permukaan pantulan akan menghasilkan pantulan pendarfluor, yang sangat mengurangkan gangguan bunyi cahaya latar belakang ke sasaran pemerhatian, jadi teknologi ini digunakan secara meluas dalam pemerhatian dinamik. bahan permukaan sel.
Gambarajah skematik jumlah mikroskop pendarfluor pantulan dalaman (TIRFM)
①Sampel ②Julat gelombang evanescent ③Kaca penutup ④Rendaman minyak ⑤Sasaran ⑥Rasuk pelepasan (isyarat) ⑦Rasuk pengujaan
Untuk mencapai jumlah pantulan dalaman, sudut kejadian yang besar diperlukan, contohnya, sudut kejadian pada antara muka air kaca adalah lebih besar daripada 61 darjah. Ini boleh dicapai dengan prisma, dipanggil TIRFM berasaskan prisma, atau dengan kanta objektif dengan apertur berangka yang tinggi, yang dipanggil TIRFM jenis objektif. Mikroskop pendarfluor pantulan dalaman total yang dikomersialkan pada umumnya adalah jenis kanta objektif, dengan kelajuan tinggi dan ketepatan tinggi.
Jumlah mikroskop pendarfluor pantulan dalaman digunakan secara meluas dalam beberapa bidang biologi kerana ia boleh merealisasikan pemerhatian pendarfluor dalam julat yang sangat nipis (kurang daripada 100nm) pada permukaan objek. Seperti aplikasi berikut:
Pemerhatian imej permukaan sel: struktur permukaan membran sel, sentuhan permukaan sel, dinamik permukaan membran/penyetempatan protein.
Pemerhatian dan manipulasi molekul tunggal: miosin, aktin dan Cy3-berlabel ATP.
Pergerakan permukaan membran sel: seperti penelanan vesikel, hembusan vesikel, dan eksokrin vesikel. yang
Pemerhatian fenomena percikan kalsium dalam membran sel, pemantauan saluran ion.
Penyelidikan motor molekul: motor putaran, protein sitoskeletal, polimer, protein G, protein cincin, motor nukleotida.
Sebagai tambahan kepada bidang biologi, ia juga mempunyai aplikasi yang baik dalam bidang kimia untuk pemerhatian struktur molekul kimia.
