Struktur asas mikroskop pendarfluor confocal
(1) Modul pengimbasan
Modul pengimbasan terutamanya terdiri daripada bar cahaya lubang jarum (mengawal ketebalan kepingan optik), spektroskop (mengubah arah perambatan cahaya mengikut panjang gelombang), colorimeter pendarfluor pelepasan (memilih cahaya dalam julat panjang gelombang tertentu untuk pengesanan), dan pengesan (tiub photomultiplier). Pendarfluor campuran dalam sampel pendarfluor memasuki pengimbas, dan selepas dipilih oleh bar cahaya lubang jarum pengesan, spektrometer dan kolorimeter, ia dibahagikan kepada pelbagai pendarfluor monokromatik, yang dikesan dalam saluran pendarfluor yang berbeza dan membentuk imej confocal yang sepadan. Pada masa yang sama, beberapa imej pendarfluor monokromatik selari dan imej kompositnya boleh dipaparkan pada skrin komputer.
(2) Sistem mikroskop pendarfluor
Mikroskop adalah komponen utama LSCM, yang berkaitan dengan kualiti pengimejan sistem. Laluan optik mikroskop boleh dimasukkan dengan mudah ke dalam sistem optik yang jauh tidak terhingga dengan pilihan optik tanpa menjejaskan kualiti pengimejan dan ketepatan pengukuran. Objektifnya mestilah objektif apertur datar apertur berangka yang besar, yang bermanfaat untuk pemerolehan pendarfluor dan pengimejan yang jelas. Penukaran kumpulan kanta objektif, pemilihan kumpulan penapis warna, pelarasan pergerakan peringkat, dan penguncian memori satah fokus semuanya harus dikawal secara automatik oleh komputer.
Mikroskop pendarfluor yang digunakan dalam mikroskop confocal pengimbasan laser secara amnya sama dengan mikroskop pendarfluor konvensional, tetapi ia mempunyai ciri-ciri tersendiri: ia perlu disambungkan kepada pengimbas, supaya laser boleh memasuki objektif mikroskop untuk menyinari sampel dan membuat pendarfluor yang dipancarkan oleh sampel mencapai pengesan; Peranti penukaran laluan cahaya diperlukan, yang menukar lampu merkuri kepada laser, dan keamatan cahaya lampu merkuri boleh dilaraskan.
(3) Laser biasa
Sumber laser yang digunakan dalam mikroskop confocal pengimbasan laser termasuk sistem laser tunggal dan pelbagai laser, dan laser yang biasa digunakan termasuk tiga jenis berikut:
Laser semikonduktor: 405nm (berhampiran garis spektrum ultraviolet)
Laser ion argon: 457nm, 477nm, 488nm, 514nm (lampu hijau biru)
Laser He-Ne: 543nm (lampu hijau He-Ne laser hijau) 633nm (lampu merah He-Ne laser merah)
Laser UV (Laser UV): 351 nm, 364 nm (cahaya UV)
(4) Peralatan bantu
Sistem penyejukan yang disejukkan dengan udara, penyejukan air dan bekalan kuasa terkawal.
Prinsip kerja asas mikroskop confocal pengimbasan laser adalah untuk memancarkan panjang gelombang tertentu cahaya pengujaan daripada laser. Selepas penguatan, cahaya melalui bar cahaya lubang jarum yang diterangi dalam pengimbas untuk membentuk sumber cahaya titik. Kanta objektif memfokuskan pada satah fokus sampel, dan titik terang yang sepadan pada sampel teruja dan memancarkan pendarfluor. Selepas melalui bar lampu lubang pengesanan, ia mencapai pengesan dan diimej pada skrin pemantauan komputer. Dengan cara ini, imej confocal lengkap dibentuk oleh imej pendarfluor setiap titik sampel pada satah fokus, yang dipanggil hirisan cahaya.
