Biomikroskopi Mengenai Isipadu Blok Tisu
Mikroskopi Biologi Setakat ini, penetapan sejuk, bahagian ultranipis beku dan pengeringan beku adalah kaedah rutin untuk bahagian mikro sinar-x tisu dan sel. Butiran kaedah ini dijelaskan seperti berikut:
Untuk mikroskop biologi dengan pemeluwap, pemeluwap boleh digerakkan ke atas dan ke bawah untuk menjadikan kecerahan sederhana, dan apertur cahaya berubah juga boleh diubah untuk mencapai kecerahan 9b sederhana. Jika cahaya cerah, pemeluwap boleh dinaikkan dengan sewajarnya, dan apertur sumber cahaya berubah boleh diperbesarkan dengan sewajarnya. Jika cahaya terlalu kuat, kanta pemeluwap boleh diturunkan dengan sewajarnya, dan apertur cahaya bersilang boleh dikurangkan dengan sewajarnya. Jika anda masih berasa mempesonakan dalam kes ini, anda boleh memilih penapis yang sesuai dan meletakkannya pada pendakap di bawah pemeluwap. Kayu oak ini akan dapat memperoleh kecerahan yang memuaskan hati anda. Sudah tentu, melaraskan kedudukan atas dan bawah pemeluwap, melaraskan saiz apertur bacaan optik berubah dan memilih penapis yang sesuai memerlukan tempoh latihan tertentu untuk mendapatkan pengalaman.
Isu yang sangat penting dalam mikroskop biologi ialah dalam proses pensampelan dan pengasingan sel, selepas pengeringan beku dan pemasukan resin (FD), selepas membekukan agregat ultra-nipis, dan selepas pengeringan beku, kandungan 65 unsur dalam setiap bahagian. mesti dikendalikan dengan teliti. Sel yang akan dianalisis tidak boleh rosak. Kerana analisis mikro X-ray bukan sahaja melibatkan banyak langkah, tetapi juga memerlukan kos yang tinggi. Sekiranya sel yang dianalisis adalah sel yang rosak atau sel mati selepas masa yang lama dan pemprosesan pelbagai langkah, amat dikesali untuk membuat kesimpulan yang salah. Sebagai contoh, kardiomiosit yang dipisahkan oleh rawatan kolagenase mempunyai dua bentuk, satu batang panjang
Biomikroskopi Jumlah dan taburan elektrolit dalam kedua-dua jenis sel ini agak berbeza. Na adalah sangat tinggi dan K sangat rendah dalam kardiomiosit bulat, dan kepekatan ca dalam nematod adalah sangat tinggi. Setelah disemak dengan kaedah analisis yang lain, terbukti bahawa Na dan K rendah sel bulat dan tinggi Ca dalam mitokondria adalah disebabkan oleh kerosakan membran sel semasa proses pemisahan sel. Kaedah penetapan ais sel dan tisu biasanya menggunakan pelindapkejutan dan penetapan terlebih dahulu, dan kemudian menyimpannya dalam nitrogen cecair. Pelindapkejutan penetapan adalah sangat penting untuk kesan pemeliharaan. Sel hidup atau tisu segar kaya dengan air. Apabila pelindapkejutan, bahagian sel atau tisu yang bersentuhan langsung dengan penyejuk yang dihancurkan (terutama apabila pelindapkejutan dengan nitrogen cecair) selalunya dibekukan dan dibetulkan terlebih dahulu, dengan itu membentuk "cangkang", yang menghalang Bahagian tengah sel telah hancur dan tetap sejuk. Oleh itu, apabila melakukan analisis kawasan mikro garis X, selalunya didapati terdapat kristal ais di tengah sel yang lebih besar. Untuk mengelakkan perkara ini berlaku, bahan dengan takat lebur yang lebih tinggi daripada nitrogen cecair tetapi lebih rendah daripada 806c digunakan sebagai penyejuk pecah. Terdapat banyak bahan sedemikian, tetapi yang paling mudah diperolehi, yang paling murah ialah propana pekat (takat didih - 42.120c, takat lebur - 187.10c, berat molekul 44.1), dan kelajuan penyejukan adalah yang terpantas . Tetapi kelemahannya ialah ia mudah terbakar.
Mikroskop biologi boleh meletakkan gentian otot pada rak khas, supaya apabila penguncupan gentian otot mencapai fasa tertentu dan perlu diperbaiki, segera mulakan muncung untuk menyembur propana cecair ke gentian otot untuk memadam dan memperbaikinya. Kemudian gentian otot bersama bingkai dikeluarkan dan dimasukkan ke dalam nitrogen cecair. Jika membetulkan sel darah atau sel terpencil, mula-mula tumpukan sel dengan sentrifugasi pada kelajuan rendah, pindahkan sel ke vial perak dengan kekonduksian haba yang baik, letakkan vial dalam propana cecair, dan bekukan untuk penetapan. Semasa membaiki pankreas tikus di makmal Dewan, kedua-dua blok keluli telah disejukkan terlebih dahulu dengan helium cecair (atau nitrogen cecair), dan dua blok kuprum diikat dengan forsep dan diletakkan di hadapan dan belakang pankreas untuk memadam dan memperbaiki pankreas. Tisu atau sel boleh disimpan dalam nitrogen cecair untuk penyimpanan jangka panjang selepas pelindapkejutan dan penetapan.
Mikroskopi Biologi Sebagai tambahan kepada kaedah bahagian ultranipis beku yang paling dihormati pada masa ini, berikut adalah satu lagi teknik pemendapan yang digunakan oleh saintis. Bahan ditambah untuk membentuk sedimen dengan komponen yang akan dianalisis untuk melumpuhkannya sebelum analisis, dan sedimen kemudian dianalisis. Sebagai contoh, orang sering menggunakan oksalat dan piroantimonat untuk mendepositkan ca dalam sel otot. Yang pertama tidak cukup sensitif terhadap kepekatan rendah Ca dalam sitoplasma; piroantimonat lebih sensitif dan boleh membentuk mendapan padat elektron dengan Ca bebas di dalam otak, tetapi piroantimonat tidak serasi dengan natrium, mangan, barium, besi Deposit juga terbentuk dan kurang spesifik. Proses penyediaan spesimen adalah serupa dengan penyediaan spesimen bahagian ultrathin mikroskop elektron penghantaran biasa, perbezaannya ialah 3 peratus kalium piroantimonat (garam penampan fosfat, pH 7.6) telah ditetapkan selama 6 jam sebelum penetapan, dan pada bahagian ultrathin otot yang berwarna, Endapan hitam dilihat pada garis tengah jalur A dan 2 setiap sarkomer, dan bahagian yang tidak bernoda digunakan untuk analisis mikro X-ray. Diaminobenzidine tetrahydrochloride (DAB) digunakan untuk memendakan bahan yang mengandungi heme dan sebagainya. Gabungan tindak balas pemendakan histokimia dan jambatan pembezaan mikro sinar-x boleh dipertimbangkan di makmal yang tidak mempunyai keadaan bahagian ultranipis beku. Separa kuantitatif boleh dilakukan mengikut ketinggian puncak unsur-unsur yang akan dianalisis
