Perbezaan antara mikroskop pendarfluor dan mikroskop biasa
Saya baru-baru ini cuba membuat beberapa bahagian tikus beku. Seterusnya, saya akan menggunakan mikroskop pendarfluor untuk melihat sama ada virus yang saya suntik berada di kawasan otak yang saya inginkan. Beberapa prinsip asas mikroskop pendarfluor perlu dipelajari secara ringkas, dan saya akan berkongsinya di sini.
Mikroskop pendarfluor menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menerangi objek yang diperiksa, menyebabkan objek mengeluarkan cahaya, dan kemudian memerhati objek di bawah mikroskop. Ia digunakan terutamanya untuk sel imunofluoresensi. Ia terutamanya terdiri daripada sumber cahaya, sistem plat penapis dan sistem optik. Imej pendarfluor sampel diperhatikan melalui pembesaran kanta mata dan kanta objektif. Mari kita lihat perbezaan antara mikroskop pendarfluor dan mikroskop optik biasa.
1. Lihat kaedah pencahayaan
Kaedah pencahayaan mikroskop pendarfluor biasanya epi-iluminasi, yang bermaksud bahawa sumber cahaya diletakkan pada sampel ujian melalui kanta objektif.
2. Tengok resolusi
Mikroskop pendarfluor menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya, yang mempunyai panjang gelombang yang lebih pendek tetapi resolusi lebih tinggi daripada mikroskop optik biasa.
3. Perbezaan dalam penapis
Mikroskop pendarfluor menggunakan dua penapis khas, satu digunakan di hadapan sumber cahaya untuk menapis cahaya yang boleh dilihat, dan satu digunakan di antara kanta objektif dan kanta mata untuk menapis sinar ultraviolet, yang boleh melindungi mata manusia.
Mikroskop pendarfluor juga merupakan sejenis mikroskop optik. Sebab utama ialah panjang gelombang yang teruja oleh mikroskop pendarfluor adalah pendek, jadi ini membawa kepada perbezaan dalam struktur dan penggunaan antara mikroskop pendarfluor dan mikroskop biasa. Kebanyakan mikroskop pendarfluor mempunyai fungsi yang baik untuk menangkap cahaya yang lemah. , jadi keupayaan pengimejannya juga baik di bawah pendarfluor yang sangat lemah. Ditambah dengan penambahbaikan berterusan mikroskop pendarfluor dalam beberapa tahun kebelakangan ini, bunyi bising juga telah dikurangkan dengan banyak. Oleh itu, semakin banyak mikroskop pendarfluor sedang digunakan.
Pengetahuan tentang mikroskop pendarfluor dua foton
Prinsip asas pengujaan dua foton ialah: di bawah keadaan ketumpatan foton yang tinggi, molekul pendarfluor boleh menyerap dua foton panjang gelombang pada masa yang sama, dan selepas jangka hayat keadaan teruja yang singkat, memancarkan foton dengan panjang gelombang yang lebih pendek. . ;Kesannya adalah sama seperti menggunakan foton dengan panjang gelombang separuh panjang gelombang panjang untuk merangsang molekul pendarfluor. Pengujaan dua foton memerlukan ketumpatan foton yang tinggi. Untuk tidak merosakkan sel, mikroskop dua foton menggunakan laser nadi terkunci mod tenaga tinggi. Laser ini memancarkan cahaya laser dengan tenaga puncak tinggi dan tenaga purata rendah, dengan lebar nadi hanya 100 femtosaat dan frekuensi 80 hingga 100 MHz. Apabila menggunakan kanta objektif apertur berangka tinggi untuk memfokuskan foton laser berdenyut, ketumpatan foton pada fokus kanta objektif adalah yang tertinggi. Pengujaan dua foton hanya berlaku pada fokus kanta objektif, jadi mikroskop dua foton tidak memerlukan lubang jarum confocal, yang meningkatkan kecekapan pengesanan Pendarfluor.
Dalam fenomena pendarfluor umum, disebabkan oleh ketumpatan foton cahaya pengujaan yang rendah, molekul pendarfluor hanya boleh menyerap satu foton pada masa yang sama dan kemudian memancarkan satu foton pendarfluor melalui peralihan sinaran. Ini adalah pendarfluor foton tunggal. Untuk proses pengujaan pendarfluor menggunakan laser sebagai sumber cahaya, fenomena pendarfluor dua foton atau berbilang foton mungkin berlaku. Dalam kes ini, keamatan sumber cahaya pengujaan yang digunakan adalah tinggi, dan ketumpatan foton memenuhi keperluan untuk molekul pendarfluor menyerap dua foton pada masa yang sama. Dalam proses menggunakan laser biasa sebagai sumber cahaya pengujaan, ketumpatan foton masih tidak mencukupi untuk menghasilkan penyerapan dua foton. Laser nadi femtosaat biasanya digunakan, dan kuasa serta-merta mereka boleh mencapai tahap megawatt. Oleh itu, panjang gelombang pendarfluor dua foton adalah lebih pendek daripada panjang gelombang cahaya pengujaan, yang bersamaan dengan kesan yang dihasilkan oleh pengujaan panjang gelombang separuh pengujaan.
