Perbezaan dan ciri antara mikroskop pendarfluor dan mikroskop cahaya biasa
Mikroskop pendarfluor adalah berbeza daripada mikroskop optik biasa kerana ia tidak mematuhi spesimen di bawah pencahayaan sumber cahaya biasa. Sebaliknya, ia menggunakan panjang gelombang cahaya tertentu (biasanya cahaya ultraviolet, cahaya ungu biru) untuk merangsang bahan pendarfluor di dalam spesimen di bawah mikroskop, menyebabkan mereka memancarkan pendarfluor. Oleh itu, peranan sumber cahaya dalam mikroskop pendarfluor bukan pencahayaan langsung, tetapi sebagai sumber tenaga untuk merangsang bahan pendarfluor di dalam spesimen. Sebab mengapa kita dapat melihat spesimen bukan disebabkan oleh pencahayaan sumber cahaya, tetapi fenomena pendarfluor yang dipamerkan oleh bahan -bahan pendarfluor di dalam spesimen selepas menyerap tenaga cahaya yang teruja. Dari sini, dapat dilihat bahawa ciri -ciri mikroskopi pendarfluor adalah terutamanya sumber cahaya yang dapat membekalkan sejumlah besar cahaya pengujaan dalam julat panjang gelombang tertentu, supaya bahan pendarfluor dalam spesimen dapat memperoleh intensitas cahaya pengujaan yang diperlukan. Pada masa yang sama, mikroskop pendarfluor mesti mempunyai sistem penapis yang sepadan. Mikroskop pendarfluor adalah alat asas dalam kimia tisu pendarfluor. Ia terdiri daripada komponen utama seperti sumber cahaya voltan ultra -, sistem penapis (termasuk pengujaan dan plat penapis penindasan), sistem optik, dan sistem fotografi. Ia menggunakan cahaya panjang gelombang tertentu untuk merangsang spesimen dan memancarkan pendarfluor.
1. Kaedah pengujaan pendarfluor: Menurut julat panjang gelombang cahaya, terdapat dua jenis: kaedah pengujaan UV (menggunakan pencahayaan ultraviolet) dan kaedah pengujaan BV (menggunakan cahaya violet biru). Kaedah pengujaan UV menggunakan cahaya ultraviolet yang lebih pendek daripada 400nm untuk pengujaan. Kaedah ini tidak mempunyai cahaya pengujaan yang dapat dilihat, jadi pendarfluor yang diperhatikan mempamerkan pendarfluor yang melekat pada pewarna, menjadikannya mudah untuk membezakan pendarfluor spesifik pada spesimen dari pendarfluor diri dari tisu latar belakang.
2. BV Kaedah Pengujaan: Ia melibatkan pengujaan dari ultraviolet ke cahaya biru yang berpusat pada 404nm dan 434nm. Kaedah ini menggunakan cahaya biru untuk menyinari spesimen, jadi potong - penapis sistem pemerhatian pendarfluor mesti menggunakan penapis yang dapat menyekat cahaya biru sepenuhnya dan melewati sepenuhnya pendarfluor hijau dan kuning yang diperlukan. Pigmen pendarfluor yang digunakan untuk kaedah antibodi pendarfluor. Panjang gelombang penyerapan maksimum cahaya pengujaan dan panjang gelombang pelepasan maksimum pendarfluor agak dekat, jadi penapis yang digunakan dalam kaedah pengujaan BV mesti menggunakan penapis potong tajam. Kaedah ini boleh menggunakan cahaya biru sebagai cahaya pengujaan, jadi kecekapan penyerapan pigmen pendarfluor adalah tinggi, dan imej yang lebih cerah dapat diperolehi. Kelemahannya ialah pendarfluor di bawah 500nm tidak dapat dilihat, manakala pendarfluor di atas 500nm menjadikan keseluruhan imej kelihatan kuning. Dalam kaedah antibodi pendarfluor, kekhususan kebanyakannya ditentukan oleh warna yang unik untuk pigmen pendarfluor, jadi apabila membincangkan kekhususan halus, kelemahan kaedah pengujaan BV yang disebutkan di atas sering mempunyai kesan yang signifikan.
