Perbezaan antara mikroskopi pendarfluor dan mikroskopi confocal
Mikroskop pendarfluor
1. Mikroskop pendarfluor menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menyinari objek yang diperiksa, menyebabkan ia memancarkan pendarfluor, dan kemudian memerhatikan bentuk dan kedudukan objek di bawah mikroskop. Mikroskopi pendarfluor digunakan untuk mengkaji penyerapan, pengangkutan, pengedaran, dan penyetempatan bahan dalam sel. Sesetengah bahan dalam sel, seperti klorofil, boleh fluoresce apabila terdedah kepada radiasi ultraviolet; Terdapat juga beberapa bahan yang tidak boleh memancarkan pendarfluor sendiri, tetapi juga boleh memancarkan pendarfluor jika berwarna dengan pewarna neon atau antibodi pendarfluor dan disinari dengan cahaya ultraviolet. Mikroskopi pendarfluor adalah salah satu alat untuk penyelidikan kualitatif dan kuantitatif terhadap bahan tersebut.
2. Prinsip mikroskop pendarfluor:
(A) Sumber cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya pelbagai panjang gelombang (dari ultraviolet hingga inframerah).
(B) Sumber cahaya penapis pengujaan: Memancarkan cahaya panjang gelombang tertentu yang boleh menyebabkan pendarfluor dalam spesimen, sambil menyekat cahaya yang tidak berguna untuk pendarfluor yang menarik.
(C) Spesimen pendarfluor: biasanya berwarna dengan pigmen pendarfluor.
(D) Menyekat penapis: Ia secara selektif menghantar pendarfluor dengan menyekat cahaya pengujaan yang tidak diserap oleh spesimen, dan beberapa panjang gelombang dalam pendarfluor juga dipancarkan secara selektif. Mikroskop yang menggunakan cahaya ultraviolet sebagai sumber cahaya untuk menjadikan objek yang diterangi memancarkan pendarfluor. Mikroskop elektron pertama kali dipasang oleh Knorr dan Haruska di Berlin, Jerman pada tahun 1931. Mikroskop ini menggunakan rasuk elektron berkelajuan tinggi dan bukannya rasuk cahaya. Oleh kerana panjang gelombang aliran elektron yang lebih pendek berbanding dengan gelombang cahaya, pembesaran mikroskop elektron boleh mencapai 8 0 0000 kali, dengan had resolusi minimum 0.2 nanometer. Mikroskop elektron pengimbasan, yang pertama kali digunakan pada tahun 1963, membolehkan orang ramai melihat struktur kecil di permukaan objek.
3. Skop Permohonan: Digunakan untuk membesarkan imej objek kecil. Umumnya digunakan untuk pemerhatian biologi, perubatan, zarah mikroskopik, dll.
mikroskop confocal
1. Mikroskop confocal menambah lensa separuh reflektif ke laluan cahaya yang dicerminkan, yang menindas cahaya yang dicerminkan yang telah melalui lensa ke arah lain. Pada titik fokusnya, terdapat baffle dengan lubang pin yang terletak di titik fokus, dan di belakang baffle adalah tiub photomultiplier. Ia boleh dibayangkan bahawa cahaya yang dicerminkan sebelum dan selepas fokus cahaya pengesanan tidak dapat difokuskan pada lubang kecil melalui sistem confocal ini dan akan disekat oleh baffle. Oleh itu, fotometer mengukur keamatan cahaya yang dicerminkan pada titik fokus.
2 Prinsip: Mikroskop optik tradisional menggunakan sumber cahaya medan, dan imej setiap titik pada spesimen dipengaruhi oleh difraksi atau cahaya yang bertaburan dari titik jiran; Mikroskop pengimbasan laser menggunakan rasuk laser untuk menerangi lubang pin dan membentuk sumber cahaya titik untuk mengimbas setiap titik pada satah fokus spesimen. Titik yang diterangi pada spesimen dicatatkan pada lubang pinket, dan diterima titik demi titik atau garis oleh tiub photomultiplier (PMT) atau peranti gandingan sejuk (CCCD) selepas mengesan pinhole, dengan cepat membentuk imej pendarfluor pada skrin monitor komputer. Pinhole pencahayaan dan pinhole pengesanan adalah conjugate relatif kepada satah fokus lensa objektif. Titik pada satah fokus secara serentak memberi tumpuan kepada pinhole pencahayaan dan pinhole pelepasan, dan titik di luar satah fokus tidak akan dicatatkan pada lubang pengesanan. Imej confocal yang dihasilkan adalah keratan rentas optik spesimen, mengatasi kelemahan imej kabur dalam mikroskop umum.
