Pengiraan terus mikroorganisma dengan mikroskop
Prinsip eksperimen
Pengiraan terus di bawah mikroskop menggunakan hemositometer ialah kaedah pengiraan mikrob yang biasa digunakan. Kelebihan kaedah ini ialah ia intuitif dan pantas. Letakkan penggantungan bakteria yang dicairkan dengan betul (atau penggantungan spora) dalam ruang pengiraan antara slaid dan kaca penutup hemositometer, dan kira di bawah mikroskop. Oleh kerana isipadu ruang pengiraan adalah tetap (0.1mm2), ia boleh ditukar kepada jumlah bilangan mikroorganisma per unit isipadu mengikut bilangan mikroorganisma yang diperhatikan di bawah mikroskop. Oleh kerana kaedah ini mengira jumlah bakteria hidup dan mati, ia juga dipanggil kaedah kiraan jumlah bakteria.
Hemositometer biasanya merupakan slaid kaca khas di mana empat alur membentuk tiga pelantar. Platform di tengah dibahagikan kepada dua bahagian oleh alur mendatar pendek. Grid diukir pada platform pada setiap sisi. Setiap grid dibahagikan kepada sembilan petak besar. Petak besar di tengah-tengah adalah bilik mengira. Mikroorganisma dikira dalam ruang pengiraan. Struktur papan pengiraan sel darah ditunjukkan dalam Rajah Ⅷ-1.
Skala bilik pengiraan biasanya mempunyai dua spesifikasi, satu ialah segi empat sama besar dibahagikan kepada 16 petak tengah, dan setiap petak tengah dibahagikan kepada 25 petak kecil (Rajah Ⅷ-2); satu lagi adalah segi empat sama besar. Petak itu dibahagikan kepada 25 petak tengah, dan setiap petak tengah dibahagikan kepada 16 petak kecil (Rajah Ⅷ-1, C). Tetapi tidak kira apa jenis papan pengiraan itu, bilangan petak kecil dalam setiap petak besar adalah sama, iaitu 16×25=400 petak kecil, seperti yang ditunjukkan dalam Rajah Ⅷ-2.
Panjang sisi setiap petak besar ialah 1 mm, dan luas setiap petak besar ialah 1 mm2. Selepas kaca penutup ditutup, ketinggian antara kaca slaid dan kaca penutup ialah 0.1 mm, jadi isipadu ruang pengiraan ialah 0.1mm3.
Apabila mengira, biasanya mengira jumlah bilangan bakteria dalam lima grid tengah, kemudian dapatkan nilai purata setiap grid tengah, dan kemudian darab dengan 16 atau 25 untuk mendapatkan jumlah bilangan bakteria dalam grid besar, dan kemudian Tukar kepada jumlah bilangan bakteria dalam 1ml larutan bakteria.
Peralatan makmal
Hemocytometer, mikroskop, slip penutup, kapilari steril;
Bahan Eksperimen
Suspensi Saccharomyces cerevisiae
Prosedur eksperimen (kaedah pengiraan langsung mikroskop mikrob)
1. pencairan
Cairkan suspensi Saccharomyces cerevisiae dengan betul. Jika larutan bakteria tidak tebal, ia tidak perlu dicairkan.
2. Bilik mengira mikroskopik
Sebelum menambah sampel, lakukan pemeriksaan mikroskopik ruang pengiraan plat pengiraan. Sekiranya terdapat kotoran, ia perlu dibersihkan sebelum mengira.
3. tambah sampel
Tutup plat hemocytometer yang bersih dan kering dengan kaca penutup, dan kemudian gunakan penitis mulut halus steril untuk menjatuhkan setitik kecil larutan Saccharomyces cerevisiae yang dicairkan dari tepi kaca penutup (tidak terlalu banyak), supaya larutan bakteria adalah dekat dengan jurang di sepanjang jurang. Osmosis kapilari memasuki ruang pengiraan dengan sendirinya, dan ruang pengiraan am boleh diisi dengan cecair bakteria. Berhati-hati supaya tidak mempunyai gelembung udara.
4. kiraan mikroskop
Selepas berehat selama 5 minit, letakkan hemositometer di atas pentas mikroskop, mula-mula gunakan kanta kuasa rendah untuk mencari lokasi ruang pengiraan, dan kemudian tukar kepada kanta kuasa tinggi untuk mengira. Jika didapati larutan bakteria terlalu pekat atau terlalu nipis sebelum dikira, perlu melaraskan semula pencairan sebelum mengira. Secara amnya, pencairan sampel memerlukan kira-kira 5-10 bakteria dalam setiap sel. Setiap ruang pengiraan memilih bakteria dalam 5 grid tengah (pilihan 4 penjuru dan grid tengah) untuk mengira. Bakteria pada garis grid biasanya hanya dikira pada garis atas dan kanan. Dalam kes tunas yis, apabila saiz badan tunas mencapai separuh daripada sel induk, kira dua bakteria. Kira sampel untuk mengira kandungan bakteria sampel daripada nilai yang dikira dalam dua ruang pengiraan.
5. Membersihkan Hemocytometer
Selepas digunakan, bilas plat pengiraan sel darah pada keran dengan pancutan air, jangan basuh dengan objek keras, dan keringkan sendiri atau dengan pengering rambut selepas mencuci. Pemeriksaan mikroskopik, perhatikan sama ada terdapat baki bakteria atau sedimen lain dalam setiap sel. Jika tidak bersih, ia mesti dibasuh berulang kali sehingga bersih.
