Ciri dan Aplikasi Mikroskopi Laser Konfokal
Mikroskop konfokal pengimbasan laser (LSCM) ialah sejenis mikroskop yang direka berdasarkan teknologi fokus konjugat, iaitu untuk menjadikan sumber cahaya laser, sampel yang diuji dan pengesan semuanya berada dalam kedudukan konjugat antara satu sama lain.
Asas
Dalam mikroskop am, satah fokus kanta objektif bertepatan dengan pengesan supaya satah imej yang diperhatikan diasingkan daripada satah paksi bersebelahan, manakala dalam mikroskop confocal, sampel diterangi dengan menggunakan titik cahaya terhad difraksi, dan dalam Kesan pengasingan ini dicapai dengan menggunakan lubang jarum dalam laluan cahaya pengumpulan pada titik fokus konjugat titik untuk menapis cahaya sesat untuk meningkatkan resolusi.
Ciri Pengimejan
Hanya cahaya yang dipantulkan kembali dari lapisan sampel terkonjugasi boleh melalui lubang kecil dalam laluan cahaya pengumpulan, dan baki pantulan lapisan sampel yang tidak berkaitan disekat oleh lubang kecil. Ini boleh mengakibatkan peningkatan yang ketara dalam resolusi. Ditunjukkan di bawah ialah perbandingan sebelah menyebelah mikroskop pendarfluor multidimensi dan mikroskopi confocal bagi sampel tebal yang sama. Apabila satu siri imej diambil pada satah fokus yang berbeza, perkara yang biasa dirujuk sebagai "tindanan z" boleh dijana, dan imej ini menunjukkan kedua-dua resolusi dan keuntungan kontras yang ditawarkan oleh mikroskop confocal dan punca asas keuntungan ini. Memeriksa imej di bahagian atas timbunan dengan satah pengimejan di atas tisu mendedahkan banyak cahaya bertaburan dalam imej pendarfluor, manakala imej confocal kelihatan hitam. Pengurangan PSF dalam arah paksi ini bertanggungjawab secara langsung untuk perbezaan resolusi yang diperhatikan pada antara muka optik di tengah tindanan z.
Satu lagi ciri mikroskopi confocal pengimbasan laser ialah ia adalah teknologi pengimejan pengimbasan. Teknologi pencahayaan medan lebar tradisional menerangi keseluruhan sampel, jadi imej boleh ditangkap secara langsung oleh mata kasar atau pengesan, tetapi LSCM menggunakan rasuk atau Rasuk fokus berbilang melalui sampel untuk pengimbasan dan pengimejan, dan imej yang terhasil adalah dipanggil bahagian optik. Berikut menunjukkan perbezaan antara kaedah pencahayaan medan lebar tradisional dan kaedah pencahayaan confocal pengimbasan laser.
Oleh itu, kaedah kerja praktikal mikroskop confocal moden ditunjukkan dalam rajah di bawah. Cahaya pengujaan yang dipancarkan oleh laser melalui cermin dichroic dan mengimbas dalam arah x dan y sampel melalui sepasang cermin bergetar. Pengujaan (atau pantulan) sampel Cahaya memasuki pengesan PMT melalui lubang jarum dan dirakam, dan imej pengimbasan yang dirakam dibina semula oleh komputer untuk mendapatkan imej sampel sebenar.
