Pemerhatian pendarfluor mikroskop optik
Pendarfluor merujuk kepada proses di mana bahan pendarfluor mengeluarkan cahaya dengan panjang gelombang yang lebih panjang hampir serentak apabila ia disinari dengan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (Rajah 1). Apabila cahaya dengan panjang gelombang tertentu (panjang gelombang pengujaan) mengenai molekul, seperti dalam fluorophore, tenaga foton diserap oleh elektron molekul. Seterusnya, elektron beralih daripada keadaan dasar (S0) kepada tahap tenaga yang lebih tinggi, keadaan teruja (S1'). Proses ini dipanggil pengujaan①. Elektron kekal dalam keadaan teruja selama 10-9–10-8 saat, di mana elektron kehilangan sedikit tenaga②. Semasa proses elektron meninggalkan keadaan teruja (S1) dan kembali ke keadaan dasar③, baki tenaga yang diserap semasa proses pengujaan dibebaskan.
Gambar rajah Jablonski pendarfluor
Masa tinggal molekul pendarfluor dalam keadaan teruja ialah jangka hayat pendarfluor, yang biasanya pada tahap nanosaat, dan merupakan ciri yang wujud bagi molekul pendarfluor itu sendiri. Pengimejan Sepanjang Hayat Pendarfluor (FLIM), yang menggunakan teknologi pengimejan seumur hidup pendarfluor, boleh melakukan pengukuran fungsi yang lebih mendalam sebagai tambahan kepada pengimejan keamatan pendarfluor, dan memperoleh konformasi molekul, interaksi antara molekul dan persekitaran mikro molekul, dsb. Maklumat yang sukar untuk dapatkan dengan pengimejan optik konvensional.
Satu lagi sifat penting pendarfluor ialah anjakan Stokes, perbezaan panjang gelombang antara pengujaan dan puncak pelepasan (Rajah 2). Biasanya panjang gelombang pelepasan lebih panjang daripada panjang gelombang pengujaan. Ini kerana elektron akan kehilangan sebahagian daripada tenaganya melalui proses kelonggaran selepas bahan pendarfluor teruja dan sebelum melepaskan foton. Bahan pendarfluor dengan anjakan Stokes yang lebih besar adalah lebih mudah untuk diperhatikan di bawah mikroskop pendarfluor.
mikroskop pendarfluor
Mikroskop pendarfluor ialah mikroskop optik yang menggunakan sifat pendarfluor untuk pemerhatian dan pengimejan, dan digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang seperti biologi sel, neurobiologi, botani, mikrobiologi, patologi, dan genetik. Pengimejan pendarfluor mempunyai kelebihan kepekaan yang tinggi dan kekhususan yang tinggi, dan sangat sesuai untuk pemerhatian pengedaran protein dan organel tertentu dalam tisu dan sel, kajian kolokalisasi dan interaksi, pengesanan proses dinamik kehidupan seperti perubahan kepekatan ion , dan lain-lain.
Kebanyakan molekul dalam sel tidak berpendarfluor, dan jika anda ingin melihatnya, anda melabelkannya secara pendarfluor. Terdapat banyak kaedah pelabelan pendarfluor, seperti pelabelan langsung (seperti menggunakan DAPI untuk melabel DNA), atau imunostaining menggunakan sifat pengikat antigen antibodi, atau menggunakan protein pendarfluor (seperti GFP, protein pendarfluor hijau) untuk melabelkan protein sasaran , dan pengikatan boleh balik. pewarna sintetik (seperti Fura-2), dsb.
Mikroskop Pendarfluor Terbalik MF53-N
Pada masa ini, mikroskop pendarfluor telah menjadi peralatan pengimejan standard pelbagai makmal dan platform pengimejan, dan merupakan pembantu yang baik untuk eksperimen harian kami. Mikroskop pendarfluor terutamanya dibahagikan kepada tiga kategori: mikroskop pendarfluor tegak (sesuai untuk keratan), mikroskop pendarfluor terbalik (sesuai untuk sel hidup, mengambil kira keratan), stereoskop pendarfluor (sesuai untuk spesimen yang lebih besar, seperti tumbuhan, ikan zebra (dewasa/embrio). ) , medaka, organ tikus/tikus, dsb.).
Teknologi pengimejan mikroskop pendarfluor digunakan secara meluas dan kaya dengan jenis, dan teknologi baharu masih muncul. Anda boleh memilih teknologi untuk menyelesaikan penyelidikan anda sendiri.
