Bagaimanakah anda boleh memilih mikroskop confocal yang sesuai untuk anda? Adakah terdapat kaedah khusus?
Mikroskopi konfokal mempunyai lebih banyak kelebihan berbanding mikroskopi medan lebar. Mikroskopi konfokal boleh melakukan pembahagian optik berterusan sampel dan mengecualikan gangguan isyarat daripada satah bukan fokus. Atas sebab ini, penggunaan mikroskop confocal sememangnya lebih biasa. Walau bagaimanapun, terdapat lebih banyak mikroskop confocal di pasaran. Bagaimana untuk memilih?
Mikroskopi konfokal mempunyai lebih banyak kelebihan berbanding mikroskopi medan lebar. Mikroskopi konfokal boleh membuat bahagian optik berterusan sampel dan mengecualikan gangguan isyarat daripada satah bukan fokus. Atas sebab ini, mikroskop confocal memang lebih biasa. Walau bagaimanapun, terdapat lebih banyak mikroskop confocal di pasaran. Bagaimana untuk memilih? Apabila memilih mikroskop confocal, terdapat dua pertimbangan asas dan penting: jenis sampel yang anda ingin kaji (cth, sel tetap atau hidup), dan jenis ujian yang anda ingin lakukan (cth, proses selular statik atau dinamik).
Pengimejan konfokal sel tetap
Untuk imej sel atau tisu tetap dan bernoda, kami biasanya memilih konfokal pengimbasan laser (LSCM). Ini terutamanya kerana sel mati tetap kekurangan kejadian biologi pantas dalam sel hidup dan boleh mendapat manfaat yang lebih baik daripada resolusi spatial LSCM yang lebih tinggi. Pengimejan LSCM adalah untuk menghiris sampel secara optik dengan laser, dan kelajuan pengimbasan (bergantung pada kelajuan cermin tatasusunan pengimbasan) biasanya 1fps. Masa pendedahan yang lebih lama bermakna risiko pelunturan foto yang lebih besar, tetapi untuk sel mati tetap masa tidak kritikal dan kita boleh meratakannya dengan mengambil berbilang gambar.
Pengimejan konfokal sel hidup
Pengimejan sel hidup memerlukan perlindungan tambahan daripada persekitaran yang tidak mesra. Apabila pengimejan, pertimbangan pertama kami adalah untuk mengekalkan daya maju dan kesihatan sel. Elemen pemanasan suhu malar dan sistem perfusi adalah penting, terutamanya untuk kajian selang masa. Peristiwa biokimia pantas yang mengawal keadaan fisiologi sel hidup adalah perkara yang kebanyakan orang mahu kaji, tetapi peristiwa ini terlalu pantas untuk LSCM konvensional. Di samping itu, pendedahan berpanjangan kepada LSCM juga menyebabkan kerosakan cahaya toksik kepada sel. Oleh itu, pengimejan sel hidup memerlukan mikroskop confocal khas.
Secara amnya terdapat dua pilihan untuk pengimejan confocal sel hidup: confocals pengimbasan laser pengimbasan pantas dan confocals cakera berputar. Mikroskopi confocal pengimbasan pantas menggantikan cermin galvanometer yang lebih perlahan dengan cermin pengimbasan resonan yang lebih pantas, membolehkan kelajuan pengimbasan sehingga 30fps; manakala spinning disk confocals (SDCMs) mempunyai kelebihan pengimbasan yang lebih pantas (walaupun tidak dapat dielakkan pada resolusi Spatial loss), kelajuannya secara teori boleh mencapai 2000fps (dalam amalan ia sering dihadkan oleh faktor lain).
Jika anda bimbang tentang pelunturan foto atau isyarat pendarfluor yang sangat lemah, maka SDCM mungkin lebih sesuai. SDCM menggunakan dua cakera berputar dengan mikrowell tersusun untuk menyebarkan cahaya pengujaan. Tidak seperti LSCM, yang mengimbas tempat sampel, SDCM memperoleh berbilang titik pada satu masa (kira-kira 100 bintik piksel), jadi kelajuan meningkat dengan banyak, dan pelunturan foto SDCM dan kurang fototoksisiti. Walau bagaimanapun, anda juga boleh menggunakan confocals pengimbasan pantas untuk meningkatkan kelajuan pengimbasan, digabungkan dengan pengesan yang sangat sensitif, dan mengurangkan tenaga cahaya pengujaan untuk mengurangkan fototoksisiti, yang boleh mengekalkan fungsi kaya confocals tradisional.
Sistem pengimejan confocal automatik
Sesetengah penyelidik suka mencari cara untuk mengubah suai mikroskop untuk memenuhi keperluan individu mereka. Dan sesetengah penyelidik tidak berminat dengan cara mikroskop sebenarnya berfungsi. Bagi yang terakhir, mikroskop confocal automatik mungkin lebih sesuai dengan keinginan mereka. Sebagai contoh, Olympus FluoViewFV10i ialah mikroskop 4-laser confocal desktop automatik sepenuhnya. Struktur bersepadunya yang padat memerlukan hampir tiada ruang pemasangan. Instrumen jenis ini sesuai untuk penyelidik yang perlu melakukan banyak pemerolehan data imej setiap hari, tetapi sudah tentu mereka tidak mencerminkan sepenuhnya fungsi dan fleksibiliti confocals tradisional. Selain itu, NikonA1 juga merupakan sistem confocal automatik sepenuhnya. Seperti kebanyakan mikroskop pengimbasan confocal konvensional, NikonA1 menggunakan kepala imbasan galvanometer, yang mempunyai resolusi lebih tinggi daripada A1R dengan kepala imbasan hibrid, tetapi kelajuan lebih perlahan (A1R ~30fps)
