Bagaimana untuk memilih mikroskop pendarfluor yang sesuai
Mikroskop pendarfluor ialah peralatan pengimejan mikroskopik standard di makmal dan jabatan patologi, yang menggunakan ciri pendarfluor untuk pemerhatian dan pengimejan. Ia digunakan secara meluas dalam pelbagai bidang seperti biologi sel, neurobiologi, botani, mikrobiologi, patologi, genetik, dll. Pengimejan pendarfluor mempunyai kelebihan kepekaan dan kekhususan yang tinggi, menjadikannya sangat sesuai untuk memerhatikan pengedaran protein tertentu, organel, dll. . dalam tisu dan sel, mengkaji penyetempatan bersama dan interaksi, menjejaki proses dinamik kehidupan seperti perubahan kepekatan ion, dan sebagainya.
Pemilihan mikroskop
Mikroskop pendarfluor terbahagi terutamanya kepada tiga kategori: mikroskop pendarfluor tegak (sesuai untuk menghiris), mikroskop pendarfluor terbalik (sesuai untuk sel hidup dan juga untuk menghiris), dan mikroskop pendarfluor stereo (sesuai untuk spesimen yang lebih besar, seperti tumbuhan, ikan zebra (dewasa/ embrio), medaka, organ tikus/tikus, dll.).
Pemilihan blok penapis pendarfluor
Pemilihan blok penapis bukan sahaja harus mempertimbangkan pengujaan dan panjang gelombang pelepasan probe pendarfluor, tetapi juga mempertimbangkan sama ada terdapat pengujaan tidak khusus dan sama ada terdapat crosstalk warna untuk sampel berlabel pelbagai warna. Dalam percubaan, kami akan memilih panjang gelombang yang paling hampir dengan puncak pengujaan sebanyak mungkin untuk pengujaan, dan julat penerimaan harus termasuk pelepasan puncak. Puncak pengujaan Alexa Fluor 488 ialah 500nm, dan penapis pengujaan 480/40 boleh dipilih dalam mikroskop pendarfluor. Blok penapis pendarfluor yang biasa digunakan dalam mikroskop pendarfluor boleh dibahagikan kepada dua jenis: laluan panjang (LP) dan laluan jalur (BP), yang juga perlu dipilih mengikut keperluan.
Mikroskop konfokal
Dalam pemerhatian mikroskop pendarfluor tradisional, disebabkan pertindihan bahan berlabel pendarfluor dan struktur pendarfluor spontan, ia diikat rapat. Walau bagaimanapun, objektif mikroskop pendarfluor jatuh tradisional bukan sahaja mengumpul cahaya dari satah fokus, tetapi juga menyerakkan cahaya ke atas dan ke bawah satah fokus, mengakibatkan pengurangan ketara dalam resolusi dan kontras imej.
Pengimejan konfokal hanya mengesan cahaya yang dipantulkan dari satah memfokus diri, sekali gus menyelesaikan masalah di atas. Sumber cahaya membentuk titik kecil dan halus pada satah fokus melalui lubang jarum, dan cahaya yang dipancarkan dari satah fokus dikumpulkan melalui kanta objektif. Majoriti pendarfluor yang dipancarkan dari titik di atas atau di bawah satah fokus kanta objektif tidak boleh menumpu ke lubang jarum. Hanya pendarfluor yang terletak dalam satah fokus dan sebahagian kecil pendarfluor nyahfokus boleh melalui lubang jarum, manakala pancaran cahaya di luar satah fokus menumpu di hadapan atau di belakang plat lubang jarum dan disekat daripada memasuki pengesan melalui lubang jarum. Imej yang dikesan adalah daripada satah fokus, jadi kualiti imej akhir amat dipertingkatkan.
Disebabkan oleh pelbagai kelebihan dan kepraktisan mikroskopi confocal pengimbasan laser, ia kini merupakan pembantu eksperimen yang amat diperlukan dalam bidang biologi sel, botani dan penyelidikan sel berketepatan tinggi. Pada masa yang sama, di pusat penyelidikan saintifik masa depan, ia akan menjadi alat penyelidikan yang paling asas dan teras.
