Faedah Mikroskopi Multifoton Pengimbasan Laser yang Lebih Baik
Mikroskopi multifoton pengimbasan laser adalah penambahbaikan utama mikroskop optik, terutamanya untuk memerhati struktur dalam sel hidup, sel tetap dan tisu, dan boleh mendapatkan struktur satah Z berbilang lapisan yang jelas dan tajam, iaitu, kepingan optik, dan boleh membina. Struktur pepejal tiga dimensi spesimen. Mikroskop confocal menggunakan sumber cahaya laser, yang dikembangkan untuk mengisi keseluruhan satah fokus belakang kanta objektif, dan kemudian menumpu ke titik yang sangat kecil pada satah fokus spesimen melalui sistem kanta kanta objektif. Bergantung pada apertur berangka kanta objektif, diameter titik pencahayaan paling terang ialah kira-kira 0.25 ~ 0.8 μm, dan kedalaman ialah kira-kira 0.5 ~ 1.5 μm. Saiz tempat confocal bergantung pada reka bentuk mikroskop, panjang gelombang laser, ciri-ciri kanta objektif, tetapan keadaan unit pengimbasan dan sifat spesimen. Mikroskop medan mempunyai julat dan kedalaman pencahayaan yang besar, manakala mikroskop confocal mempunyai pencahayaan yang tertumpu kepada titik fokus pada satah fokus. Kelebihan paling asas mikroskop confocal ialah ia boleh melakukan pembahagian optik halus spesimen pendarfluor tebal (sehingga 50 μm atau lebih), dengan ketebalan kira-kira 0.5 hingga 1.5 μm. Satu siri imej bahagian optik boleh diperolehi dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah dengan motor stepper paksi-Z mikroskop. Pemerolehan maklumat imej dikawal dalam satah yang tepat dan tidak akan diganggu oleh isyarat dari lokasi lain pada spesimen. Selepas mengalih keluar kesan pendarfluor latar belakang dan meningkatkan nisbah isyarat kepada hingar, kontras dan resolusi imej confocal dipertingkatkan dengan ketara berbanding imej pendarfluor pencahayaan medan tradisional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktur yang rumit dijalin untuk membentuk sistem yang kompleks, tetapi apabila bahagian optik yang mencukupi dapat dikumpulkan, kita boleh membina semulanya dalam 3D melalui perisian. Pendekatan eksperimen ini telah digunakan secara meluas dalam penyelidikan biologi untuk menjelaskan hubungan struktur dan fungsi yang kompleks antara sel atau tisu.
