Pengenalan kepada Mikroskopi Pendarfluor
Mikroskopi pendarfluor adalah untuk menyinari objek yang diwarnai dengan pendarfluor dengan cahaya panjang gelombang pendek, supaya ia teruja untuk menghasilkan pendarfluor panjang gelombang, dan kemudian diperhatikan. Dalam mikroskop pendarfluor, cahaya pengujaan panjang gelombang tertentu mesti dipilih daripada cahaya pencahayaan spesimen untuk menghasilkan pendarfluor, dan kemudian pendarfluor mesti dipisahkan daripada cahaya campuran cahaya pengujaan dan pendarfluor untuk pemerhatian. Oleh itu, sistem penapis memainkan peranan yang sangat penting dalam memilih panjang gelombang tertentu. Mikroskop pendarfluor digunakan secara meluas dalam biologi, perubatan dan bidang lain.
1. Komponen utama mikroskop pendarfluor:
(A) Sumber cahaya: Sumber cahaya memancarkan cahaya pelbagai panjang gelombang (daripada ultraungu kepada inframerah). yang
(B) Sumber cahaya penapis pengujaan: melalui cahaya panjang gelombang tertentu yang boleh menyebabkan spesimen menghasilkan pendarfluor, sambil menghalang cahaya yang tidak berguna untuk pendarfluor yang mengujakan. yang
(C) Spesimen pendarfluor: umumnya diwarnai dengan pigmen pendarfluor. yang
(D) Penapis menyekat: menyekat cahaya pengujaan yang tidak diserap oleh spesimen dan menghantar secara selektif pendarfluor, dan beberapa panjang gelombang dihantar secara selektif dalam pendarfluor.
yang
2. Klasifikasi mikroskop pendarfluor:
Mikroskop pendarfluor biasanya dibahagikan kepada dua jenis: penghantaran dan pelepasan epi:
a. Jenis penghantaran: cahaya pengujaan datang dari bahagian bawah objek yang akan diperiksa, dan pemeluwap adalah pemeluwap medan gelap, supaya cahaya pengujaan tidak memasuki kanta objektif, tetapi pendarfluor memasuki kanta objektif. Ia cerah pada pembesaran rendah, tetapi gelap pada pembesaran tinggi. Sukar untuk beroperasi dalam rendaman dan pemusatan minyak. Sangat sukar untuk menentukan julat pencahayaan pada pembesaran rendah, tetapi ia boleh mendapatkan latar belakang medan pandangan yang sangat gelap. Jenis penghantaran tidak digunakan untuk objek tidak telus. yang
b. Epi-jenis: Jenis penghantaran hampir dihapuskan pada masa ini. Kebanyakan mikroskop pendarfluor baharu adalah jenis epi. Sumber cahaya datang dari atas objek yang akan diperiksa, dan terdapat pembahagi rasuk di laluan optik, jadi ia sesuai untuk kedua-dua objek telus dan legap untuk diperiksa. Oleh kerana kanta objektif bertindak sebagai kanta pemeluwap, ia bukan sahaja mudah untuk dikendalikan, tetapi juga boleh mencapai pencahayaan seragam seluruh bidang pandangan daripada pembesaran rendah kepada pembesaran tinggi. yang
yang
3. Langkah berjaga-jaga untuk Fluoroskopi
a. Penyinaran jangka panjang cahaya pengujaan akan menyebabkan pengecilan pendarfluor dan pelindapkejutan, jadi memendekkan masa pemerhatian sebanyak mungkin, dan gunakan penyekat untuk menutup cahaya pengujaan apabila tidak memerhati buat sementara waktu. yang
b. Apabila memerhati dengan kanta rendaman minyak, gunakan "minyak bukan pendarfluor". yang
c. Pendarfluor hampir selalu lemah dan perlu dijalankan di dalam bilik gelap. yang
d. Adalah lebih baik untuk memasang penstabil voltan dalam bekalan kuasa, jika tidak, voltan yang tidak stabil bukan sahaja akan mengurangkan hayat lampu merkuri, tetapi juga menjejaskan kesan pemeriksaan mikroskop. yang
yang
4. Penggunaan Mikroskopi Pendarfluor
1. Keperluan penyediaan untuk spesimen mikroskop pendarfluor
a. Slaid kaca
Ketebalan slaid kaca hendaklah antara 0.8 dan 1.2mm. Slaid yang terlalu tebal akan menyerap lebih banyak cahaya pada satu tangan, dan sebaliknya, cahaya pengujaan tidak boleh tertumpu pada spesimen. Slaid mestilah licin, ketebalan seragam, dan bebas daripada pendarfluor yang jelas. Kadangkala slaid kaca kuarza digunakan. yang
b. Tutup kaca
Ketebalan kaca penutup adalah kira-kira 0.17mm, licin. Untuk menguatkan cahaya pengujaan, kaca penutup kering juga boleh digunakan, iaitu kaca penutup khas yang disalut dengan beberapa lapisan bahan (seperti magnesium fluorida) yang mempunyai kesan gangguan yang berbeza pada cahaya dengan panjang gelombang yang berbeza, yang boleh membuat pendarfluor berjalan dengan lancar. Cahaya pengujaan dilalui, dan cahaya pengujaan yang dipantulkan mengujakan spesimen. yang
c. spesimen
Hirisan tisu atau spesimen lain tidak boleh terlalu tebal. Jika terlalu tebal, kebanyakan cahaya pengujaan akan digunakan di bahagian bawah spesimen, manakala bahagian atas yang diperhatikan secara langsung oleh kanta objektif tidak boleh teruja sepenuhnya. Di samping itu, sel bertindih atau kekotoran ditutup, menjejaskan penghakiman. yang
d. Ejen pelekap
Gliserin biasanya digunakan sebagai ejen pelekap, yang mesti tiada pendarfluor auto, tidak berwarna dan lutsinar, dan kecerahan pendarfluor lebih cerah pada pH 8.5-9.5, dan ia tidak mudah pudar dengan cepat. Oleh itu, campuran yang sama bagi gliserol dan 0.5mol/L larutan penimbal karbonat dengan pH 9.0 hingga 9.5 biasanya digunakan sebagai agen pelekap. yang
e. minyak cermin
Secara amnya, minyak rendaman mesti digunakan apabila memerhati spesimen dengan mikroskop pendarfluor medan gelap dan objektif rendaman minyak. Adalah lebih baik untuk menggunakan minyak cermin bukan pendarfluor khas, yang juga boleh digantikan dengan gliserin yang disebutkan di atas, dan parafin cecair juga boleh digunakan, tetapi indeks biasannya rendah, yang sedikit menjejaskan kualiti imej.
