Mikroskopi Konfokal Laser - Ciri dan Aplikasi
Mikroskop konfokal pengimbasan laser (LSCM) ialah sejenis mikroskop yang direka berdasarkan teknologi fokus konjugat, iaitu sumber cahaya laser, sampel yang akan diukur dan pengesan semuanya berada dalam kedudukan konjugat antara satu sama lain.
Asas
Dalam mikroskop am, satah imej pemerhatian diasingkan daripada satah paksi bersebelahan dengan bertepatan dengan satah fokus kanta objektif dengan pengesan, manakala dalam mikroskop confocal, titik cahaya terhad pembelauan digunakan untuk menerangi sampel dan A lubang jarum digunakan dalam laluan cahaya terkumpul pada fokus konjugat titik cahaya untuk menapis cahaya sesat untuk mencipta kesan pengasingan ini dan dengan itu meningkatkan resolusi.
Ciri pengimejan
Pengimejan pengimbasan bahagian optik
Satu lagi ciri mikroskopi confocal pengimbasan laser ialah ia adalah teknologi pengimejan pengimbasan. Teknologi pencahayaan medan lebar tradisional menerangi keseluruhan sampel, jadi imej boleh ditangkap secara langsung oleh mata kasar atau pengesan, tetapi LSCM menggunakan rasuk atau Rasuk fokus berbilang melalui sampel untuk mengimbas dan imej. Imej yang terhasil dipanggil bahagian optik. Berikut menunjukkan perbezaan antara kaedah pencahayaan medan lebar tradisional dan kaedah pencahayaan confocal pengimbasan laser.
Oleh itu, kaedah kerja sebenar mikroskop confocal moden adalah seperti yang ditunjukkan dalam rajah di bawah. Cahaya pengujaan yang dipancarkan oleh laser melalui cermin dichroic dan diimbas dalam arah x dan arah y sampel melalui sepasang galvanometer. Pengujaan (atau pantulan) sampel ialah Cahaya memasuki pengesan PMT melalui lubang jarum dan direkodkan, dan imej imbasan yang dirakam dibina semula oleh komputer untuk membina semula imej sampel sebenar.
Hasilkan imej "z-stack" pada satah fokus yang berbeza
Hanya cahaya yang dipantulkan kembali dari lapisan sampel terkonjugasi boleh melalui lubang kecil dalam laluan cahaya pengumpulan, dan baki pantulan lapisan sampel yang tidak berkaitan disekat oleh lubang kecil. Ini boleh menghasilkan penambahbaikan resolusi yang ketara. Perbandingan sebelah menyebelah mikroskop pendarfluor multidimensi dan mikroskopi confocal sampel tebal yang sama. Apabila satu siri imej diambil pada satah fokus yang berbeza, imej yang biasanya dirujuk sebagai "tindanan z" boleh dijana, yang menggambarkan keuntungan resolusi dan kontras yang ditawarkan oleh mikroskop confocal dan punca asas keuntungan ini. Ia boleh dilihat bahawa memeriksa imej di bahagian atas timbunan dengan satah pengimejan di atas tisu mendedahkan sejumlah besar cahaya bertaburan dalam imej pendarfluor, manakala imej mikroskopi confocal kelihatan hitam. Pengurangan dalam PSF paksi ini secara langsung menghasilkan perbezaan resolusi yang diperhatikan pada antara muka optik di tengah-tengah timbunan z.
Resolusi sangat dipertingkatkan berbanding pencahayaan medan lebar
Dalam mikroskop pendarfluor, keamatan cahaya yang dipancarkan dari satu titik diterangkan oleh fungsi penyebaran titik (PSF), dan coraknya ialah cakera Airy. Resolusi sistem pendarfluor boleh diterangkan oleh jejari cakera Airy, yang boleh diterangkan oleh Apertur berangka kanta objektif dan panjang gelombang cahaya pengujaan menentukan
