Faedah mikroskopi multifoton pengimbasan laser dipertingkatkan
Mikroskop Berbilang Foto Pengimbasan Laser ialah peningkatan besar dalam mikroskop optik, terutamanya dalam keupayaan untuk memerhati struktur dalam sel dan tisu hidup dan tetap, dan untuk mendapatkan struktur satah Z berbilang lapisan yang jelas dan tajam, iaitu, kepingan optik, dari mana struktur pepejal tiga dimensi spesimen boleh dibina. Mikroskopi konfokal menggunakan sumber cahaya laser yang dikembangkan untuk mengisi keseluruhan satah fokus belakang kanta objektif, dan kemudian melalui sistem kanta kanta objektif untuk menumpu kepada bintik-bintik yang sangat kecil pada satah fokus spesimen. Bergantung pada apertur berangka kanta objektif, saiz diameter titik pencahayaan terang adalah kira-kira 0.25 ~ 0.8 μm dan kedalaman adalah kira-kira 0.5 ~ 1.5 μm. Saiz titik confocal ditentukan oleh reka bentuk mikroskop, panjang gelombang laser, ciri-ciri kanta objektif, tetapan keadaan unit pengimbasan dan sifat spesimen. Mikroskop medan mempunyai julat pencahayaan dan kedalaman pencahayaan yang besar, manakala mikroskop confocal menumpukan pencahayaan kepada satu titik fokus pada satah fokus. Kelebihan paling asas mikroskop confocal ialah keupayaan untuk membuat bahagian optik halus spesimen pendarfluor tebal (sehingga 5{12}} μm atau lebih), dengan ketebalan bahagian kira-kira 0.5 hingga 1.5 μm. Satu siri imej bahagian optik boleh diperoleh dengan menggerakkan spesimen ke atas dan ke bawah dengan motor stepper paksi-Z mikroskop. Pemerolehan maklumat imej dikawal dalam satah pertama dan tidak diganggu oleh isyarat yang dipancarkan dari lokasi lain pada spesimen. Selepas mengalih keluar kesan pendarfluor latar belakang dan meningkatkan nisbah isyarat kepada hingar, kontras dan resolusi imej confocal dipertingkatkan dengan ketara berbanding imej pendarfluor bercahaya medan konvensional. Dalam banyak spesimen, banyak komponen struktur yang rumit bercantum untuk membentuk sistem yang kompleks, tetapi apabila bahagian optik yang mencukupi dapat diperoleh, kita boleh membina semula mereka dalam tiga dimensi menggunakan perisian. Kaedah eksperimen ini telah digunakan secara meluas dalam penyelidikan biologi untuk menjelaskan hubungan struktur dan fungsi yang kompleks antara sel atau tisu.
