Bilik Darjah Pengimejan Mikroskopik丨Mikroskop Pendarfluor Medan Luas
Dalam aplikasi pengimejan sel hidup, mikroskop pendarfluor medan lebar memudahkan pemerhatian kedinamikan sel melekat yang ditanam dalam ruang persekitaran tertentu yang diletakkan di atas pentas mikroskop. Dalam konfigurasi paling asasnya, mikroskop kultur tisu terbalik standard yang dilengkapi dengan pencahayaan pendarfluor EPI digabungkan dengan sistem pengesan tatasusunan kawasan (biasanya kamera CCD), penapis pendarfluor yang sesuai dan sistem pengatup untuk mengehadkan pendedahan berlebihan sel kepada cahaya Pengujaan yang berbahaya. . Mikroskopi pendarfluor asas bergantung pada penapis gangguan yang dipadankan dengan teliti untuk memilih lebar jalur tertentu untuk pencahayaan dan pengesanan cahaya yang dipancarkan. Sumber cahaya termasuk merkuri, xenon dan lampu arka halida logam, sistem laser pengembang pancaran dan diod pemancar cahaya (LED), yang kesemuanya memerlukan spesifikasi penapis yang berbeza. Fluorofor sintetik yang digunakan dalam mikroskop pendarfluor mempunyai spektrum pancaran yang meliputi kawasan berhampiran ultraungu, boleh dilihat dan inframerah dekat. Penggunaan protein pendarfluor yang dikodkan secara genetik telah meluaskan keupayaan mikroskop pendarfluor dalam pengimejan sel hidup, membolehkan penyelidik menyasarkan kawasan subselular yang menarik dengan tepat.
Nuohai LS 18, jenis mikroskop pencahayaan lembaran cahaya baharu yang dibangunkan secara bebas oleh Nuohai, direka khas untuk pengimejan 3D resolusi tinggi bagi sampel tisu besar telus, dan didedikasikan untuk meneroka pelbagai tisu utuh seperti otak, limpa, usus kecil , buah pinggang, paru-paru, jantung, dan tumor. Struktur organ tepat 3D.
Dalam pendarfluor medan lebar, pelepasan apertur penuh yang dikumpul oleh objektif mikroskop memaksimumkan isyarat yang dirakam sambil meminimumkan masa pendedahan yang diperlukan. Oleh itu, sampel boleh digambarkan dengan tempoh cahaya yang sangat singkat. Kelemahan utama pengimejan medan lebar ialah pendarfluor dari kawasan yang jauh dari satah fokus, serta isyarat latar belakang, adalah cahaya yang tidak diingini yang sering mengaburkan ciri yang menarik. Oleh itu, pengimejan medan lebar menghasilkan hasil yang terbaik apabila ciri-ciri yang diminati adalah besar (seperti organel) atau sifatnya yang tinggi. Pelbagai jenis sampel sel hidup, termasuk sel yang melekat, bakteria, yis dan bahagian tisu yang sangat nipis, adalah calon yang sesuai untuk pengimejan pendarfluor medan lebar, namun, tisu yang lebih tebal (lebih 5 mikron) paling baik digunakan dengan pengimejan kaedah yang lebih maju.
Walaupun terdapat banyak kemajuan dalam pengimejan pendarfluor dengan pewarna pendarfluor sintetik, titik kuantum, dan protein pendarfluor, dalam beberapa kes adalah membantu untuk menggabungkan pendarfluor dengan modaliti pengimejan yang lain. Sebagai contoh, DIC boleh digunakan bersama dengan pendarfluor medan lebar untuk memantau daya maju sel dan morfologi umum semasa mengkaji fenomena yang menarik untuk sasaran berlabel tertentu. Memperoleh DIC dan pendarfluor dalam satu imej biasanya tidak praktikal, tetapi dalam mikroskop yang dikonfigurasikan dengan betul kedua-dua teknik boleh digunakan secara berurutan. Oleh itu, selepas pengimejan dalam mod epifluoresensi, imej DIC boleh diperoleh daripada sampel berlabel pendarfluor menggunakan cahaya yang dihantar. Kedua-dua imej boleh digabungkan semasa pasca analisis. Pemerolehan serentak imej DIC dan pendarfluor boleh dilakukan dalam konfigurasi mikroskop medan lebar lanjutan menggunakan pencahayaan yang dipisahkan secara spektrum (seperti inframerah boleh dilihat dan dekat) dan penyesuai kamera dwi-kamera atau pandangan belah. Dalam kebanyakan mikroskop confocal pengimbasan laser, imej boleh diperoleh dalam kedua-dua mod pendarfluor dan DIC secara serentak, menghapuskan keperluan untuk pemprosesan selepas pemerolehan. Kontras fasa dan kontras modulasi Hoffman juga boleh digunakan bersama-sama dengan mikroskop pendarfluor medan lebar. Walau bagaimanapun, dalam teknik ini, kanta objektif adalah istimewa, sama ada ia adalah gelang fasa atau plat modulasi Hoffman, ia akan menyebabkan kehilangan keamatan pelepasan sebanyak 5-15 peratus .
Pautan artikel: Rangkaian Peralatan Instrumen https://www.instrumentsinfo.com/technology/show-1123.html
