Keperluan Ketebalan Mikroskop Optik untuk Slaid Kaca
Dehidrasi Mikroskopik dan Lampiran Sampel: Disebabkan oleh sentrifugasi berulang, sel-sel hilang, jadi lebih baik untuk melekatkan sel-sel pada permukaan slaid kaca atau kepingan plastik untuk mikroskop optik, supaya sel-sel dehidrasi dan dikeringkan bersama-sama kaca slaid atau kepingan plastik. Keperluan untuk ketebalan slaid kaca dalam mikroskop optik Untuk membolehkan sel melekat pada slaid kaca atau kepingan plastik, perlu terlebih dahulu meletakkan lapisan filem pada slaid kaca atau kepingan plastik. Kaedah meletakkan filem adalah seperti berikut:
(1) Kaedah termudah untuk mikroskop optik ialah meletakkan lapisan nipis filem polivinil formal (formvar). Rendam slaid yang telah dibersihkan dalam (0.5-1) peratus larutan polivinil kloroform formal. Selepas suasana meruap, filem putih muncul pada slaid. Goncangkan slaid beberapa kali dalam kloroform untuk membuat perubahan filem. Nipis dan sedia untuk digunakan.
(2) Jatuhkan 0.1 latitud poli-L-lisin (larutkan 1 mg poli-lisin dalam 1 ml air yang ditapis semasa penyediaan) pada slaid kaca yang telah dibersihkan, dan masukkannya ke dalam kotak bekalan 450C selepas titisan terbentang. . kering. Kaedah ini adalah yang terbaik kerana poli-L-lisin bercas positif, membolehkan lebih banyak sel bercas negatif permukaan melekat.
(3) Tambah plasma dan gliserol kepada air suling pada nisbah (30--40) peratus dan (3-5) peratus mengikut keperluan mikroskop optik untuk ketebalan slaid untuk membentuk protein gliserol penyelesaian. Cecair dijatuhkan pada slaid kaca yang telah dibersihkan, dibuka dan dikeringkan di bawah mikroskop optik. Filem protein yang diletakkan direndam dalam 2 peratus glutaraldehid untuk membetulkan protein, dibasuh dan dikeringkan untuk kegunaan kemudian. Sebelum digunakan, plasma dijatuhkan pada filem protein Jadikan ia "diaktifkan", bilas dengan penimbal selepas 30 minit, dan ia boleh digunakan secara langsung.
Sel tetap dan dibersihkan dijadikan kepekatan penggantungan sel yang sesuai dengan air yang ditapis di bawah mikroskop digital, dan mikroskop optik diletakkan di atas slaid kaca atau kepingan plastik yang telah ditutup dengan membran, dan diletakkan di dalam lembap, rendah. persekitaran suhu (40C) ( 30-120) minit untuk membenarkan sel melekat pada membran. Gunakan pinset halus untuk mengambil slaid kaca dan goncangkannya dalam air suling berganda bersih, dan basuh sel yang tidak bercantum dengan mikroskop optik. Keperluan untuk ketebalan slaid dalam mikroskop optik Mikroskop polarisasi kemudian diletakkan dengan cepat di dalam bekas yang diisi dengan 50 peratus aseton (atau etanol). Proses dehidrasi adalah untuk meletakkan slaid ke dalam aseton atau etanol dengan kepekatan meningkat setiap 3 minit, dan mikroskop optik atau terus meningkatkan kepekatan agen penyahhidratan dalam bekas slaid kaca. Mengikut pengalaman makmal penulis, operasi yang terakhir adalah lebih mudah. Kaedah khusus mikroskop optik boleh menyedut keluar separuh daripada agen penyahhidratan dalam bekas setiap 3 minit, dan kemudian menambah jumlah agen penyahhidratan yang sama dengan kepekatan 100 peratus . Selepas 5-6 operasi, kepekatan agen penyahhidratan dalam bekas harga mikroskop mencecah melebihi 0.5 peratus , dan sel-sel mengalami dehidrasi dengan jayanya. Selepas pengeringan titik kritikal, slaid kaca atau kepingan plastik dilekatkan pada jeti sampel dengan pelekat konduktif untuk salutan logam. Terdapat juga kemudahan untuk melekatkan sel pada membran yang ditetapkan oleh kaedah ketiga. Mikroskop optik boleh menggantung sel-sel yang ditetapkan oleh kepekatan rendah glutaraldehid pada filem protein "diaktifkan". Mikroskop optik memerlukan ketebalan slaid kaca untuk diletakkan selama 10 minit, dan slaid kaca atau kepingan plastik direndam dalam 2 peratus glutaraldehid. Selepas 30 minit, bilas dengan air suling berganda yang ditapis, dan kemudian dehidrasi, kering dan salut logam mengikut kaedah di atas.
