PH meter - Penentuan dan pelarasan pH sederhana
Semua mikroorganisma dipengaruhi oleh pH persekitaran tempat mereka hidup. Selalunya, kehadiran spesies terpilih menyempitkan julat pH di mana ia tumbuh. Kadangkala, keasidan atau kealkalian medium juga boleh bertindak sebagai faktor pemilihan pertumbuhan. Bagi media ujian biokimia, walau bagaimanapun, julat pH di mana mikroorganisma mempamerkan aktiviti tk dalam substrat adalah lebih sempit daripada julat pH yang diperlukan untuk pertumbuhan: oleh itu, adalah penting untuk melaraskan pH media kepada julat yang dijangkakan. Apabila makmal menyediakan medium mengikut komposisi medium, pH mesti diperiksa dan diselaraskan. Perlu diingatkan bahawa walaupun untuk medium dehidrasi sintetik siap sedia yang disediakan oleh pengilang (terutama untuk beberapa medium dehidrasi stok), pH akhir perlu diukur selepas membuat medium eksperimen.
Cara paling tepat untuk mengukur pH sesuatu medium ialah dengan meter pH. Sebelum digunakan, ia mesti ditentukur dengan larutan penimbal piawai pH yang diketahui (biasanya pH ialah 4 hingga 7). Bilas elektrod meter pH dengan air suling dan rendamkannya dalam medium kultur dalam bikar, dan kemudian baca pH medium kultur daripada skala meter pH. Setiap pengeluar menyediakan arahan operasi terperinci untuk setiap jenis meter pH.
Semasa menyediakan medium kultur, PH boleh diselaraskan dengan mudah dengan menggunakan meter pH dengan kacau mekanikal. Medium kultur hendaklah disediakan dalam bekas (seperti bikar besar) yang boleh dikacau secara berterusan. atau magnet berbalut Teflon. pH medium yang mengandungi agar-agar perlu diselaraskan selepas pencairan, yang mudah dilakukan dengan pengacau magnet yang boleh dipanaskan. Apabila melaraskan pH, gunakan larutan penimbal standard pH yang diketahui untuk menentukur meter pH terlebih dahulu. Kemudian masukkan elektrod komposit dan termometer rintangan (jika ada) ke dalam medium, perlahan-lahan tambah jumlah asid hidroklorik dan natrium hidroksida yang sesuai dari hujung bikar jauh dari elektrod, supaya medium boleh mencapai dan mengekalkan pH yang diperlukan.
Pampasan suhu meter pH harus mengambil kira kesan suhu pada sistem elektrod: dalam beberapa pencairan dan media, pH berubah dengan ketara mengikut suhu. Untuk media cecair dan pencairan, pH biasanya boleh diselaraskan dan diukur sama ada pada 25 darjah atau pada suhu di mana ia digunakan.
pH medium agar mesti diselaraskan selepas larut, dan suhu larut adalah melebihi 45 darjah : oleh itu, pH medium pepejal harus ditentukan pada suhu penggunaannya. Pada masa ini, elektrod komposit kepala rata harus digunakan, dan pampasan suhu meter pH hendaklah ditentukur secara manual. Semasa menyediakan medium kultur, jika ditentukan pH medium kultur berbeza antara keadaan lebur dan keadaan pemejalan, bermakna terdapat ralat dalam melaraskan pH.
Begitu juga, apabila medium yang disediakan disterilkan haba (cth, diautoklaf), ia juga mungkin mengalami perubahan pH. Untuk medium dehidrasi, pengilang telah mengambil kira perkara ini, dan biasanya tidak perlu melaraskan pH, tetapi pH medium yang akan digunakan perlu diperiksa dengan teliti. Jika pH medium agar dehidrasi mesti diselaraskan semasa pelarutan semula atau penyediaan, adalah lebih baik untuk menyesuaikannya dengan asid hidroklorik tersteril penapis dan larutan natrium hidroksida selepas langkah pensterilan untuk mengelakkan pembentukan terlalu panas medium. Apabila menyediakan media dengan bahan mentah atau farmaseutikal yang berbeza, pH media mesti diperiksa selepas autoklaf. Di samping itu, jika pH medium didapati berubah sama selepas setiap autoklaf, pH boleh diselaraskan dengan sewajarnya semasa menyediakan medium. Walau bagaimanapun, masih perlu untuk menentukan pH akhir medium selepas pensterilan.
