Penyediaan dan pemerhatian sampel biologi untuk mikroskop elektron
Resolusi mikroskop bergantung pada panjang gelombang cahaya yang digunakan. Mikroskop elektron, yang mula muncul pada tahun 1933, menggunakan pancaran elektron dengan panjang gelombang jauh lebih pendek daripada cahaya yang boleh dilihat sebagai sumber cahaya, supaya resolusi yang boleh dicapainya bertambah baik berbanding dengan mikroskop optik. Perbezaan sumber cahaya juga menentukan satu siri perbezaan antara mikroskop elektron dan mikroskop optik.
Mengikut perbezaan dalam prinsip pengimejan rasuk elektron dan cara yang berbeza untuk bertindak ke atas sampel, mikroskop elektron moden telah berkembang menjadi pelbagai jenis. Pada masa ini, yang paling biasa digunakan ialah mikroskop elektron penghantaran dan mikroskop elektron pengimbasan. Jumlah pembesaran bekas boleh antara 1000-1000000. Jumlah pembesaran yang terakhir boleh berbeza antara 20 dan 300,000 kali. Eksperimen ini terutamanya memperkenalkan penyediaan dua jenis sampel mikroskop, mikroskop elektron penghantaran dan mikroskop elektron pengimbasan.
2. Peralatan
1. Bakteria Escherichia coli (Escherichia coli) condong.
2. Larutan atau reagen amil asetat, asid sulfurik pekat, etanol mutlak, air steril, 2% natrium fosfotungstat (pH 6.5-8.0) larutan akueus, 0.3% polietilena larutan formaldehid (larut dalam kloroform), sel Pigmen c, ammonium asetat, plasmid pBR322.
3. Alat atau perkakas lain: mikroskop optik biasa, jaring tembaga, corong porselin, bikar, pinggan mangkuk, penitis steril, pinset steril, pin, slaid, papan pengiraan, mesin salutan vakum, pengering titik kritikal, dsb.
3. Langkah-langkah operasi
(1) Penyediaan sampel dan pemerhatian untuk mikroskop elektron penghantaran
1. Rawatan mesh logam
Sampel untuk mikroskop optik diletakkan di atas slaid kaca untuk pemerhatian. Walau bagaimanapun, dalam mikroskop elektron penghantaran, kerana elektron tidak dapat menembusi kepingan kaca, bahan mesh hanya boleh digunakan sebagai pembawa, biasanya dipanggil jaring pembawa. Jaringan pembawa boleh dibahagikan kepada banyak spesifikasi berbeza disebabkan oleh bahan dan bentuk yang berbeza, antaranya yang paling biasa digunakan ialah 200-400 mesh (bilangan lubang) mesh kuprum. Mesh tembaga mesti dirawat sebelum digunakan untuk menghilangkan kotoran dan memastikan ia bersih, jika tidak, ia akan menjejaskan kualiti filem sokongan dan kejelasan foto spesimen. Percubaan ini menggunakan 400-jaring kuprum jaringan, yang boleh dirawat seperti berikut: pertama, rendam dan pelunturkannya dengan amil asetat selama beberapa jam, kemudian bilas dengan air suling beberapa kali, dan kemudian rendam dalam etanol mutlak selama dehidrasi. Jika jaring kuprum masih tidak bersih selepas kaedah di atas, anda boleh merendamnya dalam asid sulfurik pekat cair (1:1) selama 1 hingga 2 minit, atau rebus dalam larutan NaOH 1% selama beberapa minit, bilas dengan suling. air beberapa kali, dan kemudian masukkan ke dalam Dehidrat anhydrous dalam etanol dan ketepikan.
2. Penyediaan membran sokongan
Apabila memerhati sampel, jaring pembawa juga harus ditutup dengan lapisan filem seragam yang tidak berstruktur, jika tidak, sampel kecil akan bocor keluar dari lubang jaring pembawa. Filem ini biasanya dipanggil filem sokongan atau filem pembawa. Filem sokongan hendaklah telus elektron, dan ketebalannya biasanya kurang daripada 20nm; di bawah kesan pancaran elektron, filem itu juga harus mempunyai kekuatan mekanikal tertentu untuk mengekalkan kestabilan struktur dan mempunyai kekonduksian terma yang baik; di samping itu, rangkaian sokongan harus digunakan dalam mikroskop elektron. Tiada struktur yang boleh dilihat di bawahnya, tiada tindak balas kimia dengan sampel yang dibawa, dan tiada gangguan terhadap pemerhatian sampel. Ketebalannya biasanya kira-kira 15nm. Filem sokongan boleh berupa filem plastik (seperti filem collodion, filem polietilena formaldehid, dll.), filem karbon atau filem logam (seperti filem berilium, dll.). Di bawah keadaan kerja biasa, filem plastik boleh memenuhi keperluan. Antara filem plastik, filem collodion agak mudah disediakan, tetapi kekuatannya tidak sebaik filem polietilena formaldehid.
