Menyediakan dan memerhati sampel biologi untuk mikroskop elektron
Resolusi mikroskop bergantung pada panjang gelombang cahaya yang digunakan, mikroskop elektron mula muncul pada tahun 1933 adalah disebabkan oleh penggunaan panjang gelombang yang jauh lebih pendek daripada cahaya tampak pancaran elektron sebagai sumber cahaya, sehingga resolusi itu boleh mencapai daripada mikroskop optik sangat bertambah baik. Sumber cahaya yang berbeza juga menentukan satu siri perbezaan antara mikroskop elektron dan mikroskop optik.
Mengikut perbezaan dalam prinsip pengimejan pancaran elektron dan peranan sampel pada cara yang berbeza, mikroskop elektron moden telah dibangunkan untuk membentuk beberapa jenis, pada masa ini * yang biasa digunakan ialah mikroskop elektron penghantaran dan pengimbasan elektron mikroskop, yang pertama boleh berada dalam julat 1,000-1,000,000 kali jumlah pembesaran julat perubahan, yang kedua boleh dalam jumlah pembesaran { {4}},000 kali jumlah pembesaran perubahan antara. Eksperimen ini memfokuskan kepada penyediaan sampel untuk dua jenis mikroskop iaitu mikroskop elektron penghantaran dan mikroskop elektron pengimbasan.
Bahan
1. Terikan Escherichia coli (Escherichia coli, Escherichia coli) condong.
2. Larutan atau reagen Amil asetat, asid sulfurik pekat, etanol kontang, air steril, 2% asid natrium fosfotungstik (pH 6.5-8.0) larutan akueus, 0.3% larutan polivinil formaldehid (larut dalam triklorometana), sitokrom c, ammonium asetat, plasmid pBR322.
3. Instrumen atau peralatan lain Mikroskop optik biasa, jaring kuprum, corong porselin, bikar, pinggan rata, buret steril, pinset steril, lancet, slaid, ** plat mengira, penyalut vakum, pengering titik kritikal dan sebagainya.
Langkah-langkah operasi
(I) Penyediaan sampel dan pemerhatian mikroskop elektron penghantaran
1. Rawatan mesh logam
Sampel untuk mikroskop optik diletakkan pada slaid untuk pemerhatian. Walau bagaimanapun, dalam mikroskop elektron penghantaran, kerana elektron tidak dapat menembusi kepingan kaca, hanya bahan mesh boleh digunakan sebagai pembawa, biasanya dipanggil mesh pembawa. Jaringan pembawa boleh dibahagikan kepada banyak spesifikasi yang berbeza disebabkan oleh bahan dan bentuk yang berbeza, yang mana * yang biasa digunakan ialah jaringan tembaga 200-400 (bilangan lubang). Mesh tembaga perlu dirawat sebelum digunakan untuk mengeluarkan kotoran di atasnya dan memastikan ia bersih, jika tidak, ia akan menjejaskan kualiti filem sokongan dan kejelasan foto spesimen. Jaringan tembaga yang digunakan dalam eksperimen ini ialah 400 mesh, yang boleh dirawat dengan cara berikut: pertama, pelunturkannya dengan amil asetat selama beberapa jam, kemudian bilas dengan air suling selama beberapa kali, dan kemudian pelunturkannya dalam etanol kontang selama dehidrasi. Jika mesh tembaga dengan kaedah di atas masih tidak bersih, boleh digunakan untuk mencairkan asid sulfurik pekat (1:1) direndam dalam 1 ~ 2 minit, atau dalam larutan NaOH 1% direbus selama beberapa minit, dibilas beberapa kali dengan air suling , diletakkan dalam dehidrasi etanol kontang, untuk digunakan.
2. Penyediaan filem sokongan
Dalam pemerhatian sampel, dalam rangkaian pembawa juga harus ditutup dengan lapisan filem seragam yang tidak berstruktur, jika tidak, sampel kecil akan bocor keluar dari lubang dalam rangkaian pembawa, lapisan filem ini biasanya dipanggil filem sokongan atau filem pembawa. Filem sokongan hendaklah telus kepada elektron, dan ketebalannya biasanya kurang daripada 20nm; di bawah kesan pancaran elektron, filem itu juga harus mempunyai tahap kekuatan mekanikal tertentu, dapat mengekalkan kestabilan struktur, dan mempunyai kekonduksian terma yang baik; di samping itu, rangkaian sokongan sepatutnya tidak mempunyai struktur yang boleh dilihat di bawah mikroskop elektron, dan tidak mempunyai tindak balas kimia dengan sampel yang dibawa, dan tidak mengganggu pemerhatian sampel, dan ketebalannya biasanya kira-kira 15nm. Filem sokongan boleh dibuat daripada filem plastik (cth filem kapas api, filem polietilena formaldehid, dsb.), filem karbon atau filem logam (cth filem berilium, dsb.). Di bawah keadaan kerja rutin, keperluan boleh dipenuhi dengan filem plastik, manakala penyediaan filem plastik dalam filem pelekat kapas api agak mudah, tetapi kekuatannya tidak sekuat filem polietilena formaldehid.
