Prinsip dan Pembinaan Mikroskop Pendarfluor
Mikroskop pendarfluor menggunakan sumber cahaya titik kecekapan bercahaya tinggi, yang memancarkan panjang gelombang cahaya tertentu (seperti cahaya ultraungu 3650 in atau cahaya biru ungu 4200 in) melalui sistem penapisan warna sebagai cahaya pengujaan, dan mengujakan bahan pendarfluor dalam sampel untuk mengeluarkan pelbagai warna pendarfluor. Selepas itu, ia diperhatikan melalui pembesaran objektif dan kanta mata. Dengan cara ini, walaupun dengan pendarfluor yang lemah, ia mudah dikenali dan sangat sensitif di bawah latar belakang kontras yang kuat, terutamanya digunakan untuk mengkaji struktur dan fungsi sel, serta komposisi kimia. Struktur asas mikroskop pendarfluor terdiri daripada mikroskop optik biasa dan beberapa aksesori (seperti sumber cahaya pendarfluor, penapis pengujaan, pemisah rasuk bichromatik dan penapis penyekat, dsb.). Sumber cahaya pendarfluor - biasanya menggunakan lampu merkuri tekanan ultra tinggi (50-200W), yang boleh memancarkan cahaya pelbagai panjang gelombang. Walau bagaimanapun, setiap bahan pendarfluor mempunyai panjang gelombang cahaya pengujaan yang menghasilkan pendarfluor terkuat, jadi penapis pengujaan (biasanya penapis pengujaan ultraungu, ungu, biru dan hijau) perlu ditambah untuk membenarkan hanya panjang gelombang cahaya pengujaan tertentu melalui dan menerangi. spesimen, sambil menyerap semua cahaya lain. Selepas disinari oleh cahaya teruja, setiap bahan memancarkan pendarfluor yang boleh dilihat dengan panjang gelombang yang lebih panjang daripada penyinaran dalam tempoh masa yang sangat singkat. Pendarfluor mempunyai kekhususan dan umumnya lebih lemah daripada cahaya pengujaan. Untuk melihat pendarfluor tertentu, penapis menyekat (atau menekan) perlu ditambah di belakang kanta objektif. Ia mempunyai dua fungsi: pertama, ia menyerap dan menyekat cahaya pengujaan daripada memasuki kanta mata untuk mengelakkan pendarfluor yang mengganggu dan merosakkan mata; kedua, ia memilih dan membenarkan pendarfluor tertentu melaluinya, memaparkan warna pendarfluor tertentu. Kedua-dua jenis penapis mesti dipilih untuk digunakan bersama.
Terdapat dua jenis mikroskop pendarfluor berdasarkan laluan optiknya:
1. Mikroskop pendarfluor penghantaran: Sumber cahaya pengujaan dihantar melalui bahan spesimen melalui pemeluwap untuk mengujakan pendarfluor. Pengumpul cahaya medan gelap yang biasa digunakan, atau pengumpul cahaya biasa, boleh digunakan untuk melaraskan pemantul untuk menukar cahaya pengujaan dan cahaya sisi ke spesimen. Ini adalah mikroskop pendarfluor yang agak lama. Kelebihannya ialah pendarfluor kuat pada pembesaran rendah, manakala kelemahannya ialah pendarfluor menjadi lemah apabila pembesaran meningkat. Oleh itu, adalah lebih baik untuk memerhatikan bahan spesimen yang lebih besar.
2. Mikroskop pendarfluor rasuk jatuh Ini adalah jenis mikroskop pendarfluor jenis baru yang dibangunkan pada zaman moden. Tidak seperti yang sebelumnya, cahaya pengujaan jatuh dari kanta objektif ke permukaan spesimen, menggunakan kanta objektif yang sama seperti pemeluwap pencahayaan dan kanta objektif untuk mengumpul pendarfluor. Pemisah rasuk dwi warna perlu ditambah pada laluan optik, iaitu pada sudut 45 darjah kepada uranium cahaya. Cahaya pengujaan dipantulkan ke dalam kanta objektif dan tertumpu pada sampel. Pendarfluor yang dihasilkan oleh sampel, serta cahaya pengujaan yang dipantulkan dari permukaan kanta objektif dan kaca penutup, memasuki kanta objektif secara serentak dan kembali ke pemisah rasuk dichroic, memisahkan pengujaan dan pendarfluor. Pengujaan sisa kemudiannya diserap oleh penapis penyekat. Jika penapis pengujaan yang berbeza/pemisah rasuk dwi warna/kombinasi penapis penyekat digunakan, ia boleh memenuhi keperluan produk tindak balas pendarfluor yang berbeza. Kelebihan mikroskop pendarfluor ini ialah bidang pencahayaan penglihatan adalah seragam, pengimejan adalah jelas, dan semakin besar pembesaran, semakin kuat pendarfluor.
