Penggunaan asas mikroskop medan gelap adalah seperti berikut
1. Pasang pemeluwap medan gelap (atau gunakan kertas hitam tebal untuk membuat perisai cahaya dan letakkan di bawah pemeluwap mikroskop biasa untuk mendapatkan kesan medan gelap).
2. Pilih sumber cahaya yang kuat, biasanya dengan cahaya mikroskop untuk menghalang cahaya langsung daripada memasuki kanta objektif.
3. Tambah setitik minyak cedar antara pemeluwap dan slaid kaca untuk mengelakkan pantulan total cahaya yang menerangi pada pemeluwap, gagal mencapai objek yang akan diperiksa dan pencahayaan medan gelap.
4. Lakukan pelarasan pusat, iaitu gerakkan pemeluwap secara mendatar supaya paksi optik pemeluwap dan paksi optik mikroskop berada pada garis lurus. Angkat dan turunkan kondenser, selaraskan titik fokus pemeluwap (puncak rasuk kon dalam Rajah 1-2) kepada objek yang akan diuji.
5. Pilih kanta objektif yang sepadan dengan pemeluwap, laraskan panjang fokus, dan kendalikan mengikut kaedah mikroskop biasa.
