Mengapa kita memerlukan mikroskop confocal?
1. Selepas usaha dan penambahbaikan pendahulu kami yang hebat, mikroskop optik telah mencapai tahap yang sempurna. Malah, mikroskop biasa boleh memberikan kita imej mikroskopik yang cantik dengan mudah dan cepat. Walau bagaimanapun, satu peristiwa yang membawa inovasi revolusioner kepada dunia mikroskop yang hampir sempurna ini berlaku, iaitu ciptaan "mikroskop confocal pengimbasan laser". Ciri-ciri mikroskop jenis baru ini ialah ia menggunakan sistem optik yang hanya mengekstrak maklumat imej pada permukaan di mana fokusnya tertumpu. Dengan menukar fokus dan memulihkan maklumat yang diperolehi dalam memori imej, ia boleh memperoleh imej yang jelas dengan kecerdasan maklumat 3D yang lengkap. Melalui kaedah ini, maklumat tentang bentuk permukaan yang tidak dapat disahkan oleh mikroskop konvensional boleh diperolehi dengan mudah. Di samping itu, untuk mikroskop optik biasa, "resolusi meningkat" dan "kedalaman fokus mendalam" adalah keadaan bercanggah, terutamanya pada pembesaran tinggi. Walau bagaimanapun, dalam mikroskop confocal, masalah ini mudah diselesaikan.
2. Kelebihan sistem optik confocal
Sistem optik confocal digunakan untuk pencahayaan titik sampel, dan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh penderia titik. Apabila sampel diletakkan dalam kedudukan fokus, hampir semua cahaya yang dipantulkan boleh mencapai sensor. Apabila sampel menyimpang dari titik fokus, cahaya yang dipantulkan tidak dapat mencapai sensor. Maksudnya, dalam sistem optik confocal, hanya imej yang bertepatan dengan fokus akan dikeluarkan, dan titik dan cahaya berselerak yang tidak berguna akan dilindungi.
Mengapa menggunakan laser?
Dalam sistem optik confocal, pencahayaan titik digunakan pada sampel, dan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh penderia titik. Oleh itu, sumber cahaya titik telah menjadi perlu. Laser adalah sumber cahaya yang sangat titik. Dalam kebanyakan kes, sumber cahaya mikroskop confocal adalah laser. Di samping itu, monokromatik, arah, dan bentuk pancaran yang sangat baik bagi laser juga merupakan sebab penting untuk penggunaan meluasnya.
4. Pemerhatian masa nyata berdasarkan pengimbasan berkelajuan tinggi menjadi mungkin
Pengimbasan laser menggunakan Reflektor Optik Akustik (AO) dalam arah mendatar dan cermin Servo Galvano dalam arah menegak. Disebabkan ketiadaan getaran mekanikal dalam unit pincang optik audio, adalah mungkin untuk melakukan pengimbasan berkelajuan tinggi dan memerhati dalam masa nyata pada skrin pemantauan. Kelajuan tinggi kamera jenis ini adalah faktor yang sangat penting yang secara langsung mempengaruhi pemfokusan dan kelajuan pengambilan kedudukan.
5. Hubungan antara kedudukan fokus dan kecerahan
Dalam sistem optik confocal, apabila sampel diletakkan dengan betul dalam kedudukan fokus, kecerahan adalah tinggi, dan kecerahan berkurangan dengan mendadak sebelum dan selepasnya (garisan pepejal dalam Rajah 4). Selektiviti sensitif satah fokus ini adalah tepat prinsip di sebalik penentuan arah ketinggian dan pengembangan kedalaman fokus dalam mikroskop confocal. Berbanding dengan ini, mikroskop optik biasa tidak menunjukkan perubahan kecerahan yang ketara sebelum dan selepas kedudukan fokus (garis putus-putus dalam Rajah 4).
6. Kontras dan resolusi tinggi
Mikroskop optik biasa, disebabkan oleh gangguan yang disebabkan oleh cahaya yang dipantulkan yang menyimpang dari titik fokus, bertindih dengan bahagian pengimejan fokus, mengakibatkan pengurangan kontras imej. Sebaliknya, dalam sistem optik confocal, cahaya berselerak di luar fokus dan cahaya berselerak di dalam kanta objektif hampir dialih keluar sepenuhnya, dengan itu memperoleh imej dengan kontras yang sangat tinggi. Di samping itu, disebabkan oleh fakta bahawa cahaya melalui kanta objektif dua kali, imej titik menjadi lebih tajam terlebih dahulu, yang juga meningkatkan resolusi mikroskop.
