Mengapa anda memerlukan mikroskop confocal?
1. Selepas usaha dan penambahbaikan pendahulu kami yang hebat, mikroskop optik telah mencapai tahap kesempurnaan. Malah, mikroskop biasa boleh memberikan kita imej mikroskopik yang cantik dengan mudah dan cepat. Walau bagaimanapun, satu peristiwa yang membawa inovasi revolusioner kepada dunia mikroskop yang hampir sempurna ini berlaku, iaitu ciptaan "mikroskop confocal pengimbasan laser". Ciri mikroskop jenis baharu ini ialah ia menggunakan sistem optik yang hanya mengekstrak maklumat imej pada permukaan di mana tumpuan tertumpu, dan memulihkan maklumat yang diperolehi dalam memori imej sambil menukar fokus, supaya maklumat 3D yang lengkap dapat diperolehi. Imej kecerdasan yang jelas. Dengan kaedah ini, adalah mungkin untuk mendapatkan maklumat tentang bentuk permukaan dengan mudah yang tidak dapat disahkan dengan mikroskop biasa. Di samping itu, untuk mikroskop optik biasa, "resolusi meningkat" dan "kedalaman fokus mendalam" adalah keadaan bercanggah, terutamanya pada pembesaran tinggi, percanggahan ini lebih menonjol, tetapi dari segi mikroskop confocal, masalah ini mudah diselesaikan.
2. Kelebihan sistem optik confocal
Sistem optik confocal melakukan pencahayaan titik pada sampel, dan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh penerima titik. Apabila sampel diletakkan dalam kedudukan fokus, hampir semua cahaya yang dipantulkan boleh mencapai fotoreseptor, dan apabila sampel tidak fokus, cahaya yang dipantulkan tidak boleh mencapai fotoreseptor. Maksudnya, dalam sistem optik confocal, hanya imej yang bertepatan dengan titik fokus akan dikeluarkan, dan bintik-bintik cahaya dan cahaya berselerak yang tidak berguna akan dilindungi.
3. Mengapa menggunakan laser?
Dalam sistem optik confocal, sampel diterangi pada satu titik, dan cahaya yang dipantulkan juga diterima oleh fotoreseptor titik. Oleh itu, sumber cahaya titik menjadi perlu. Laser adalah sumber cahaya yang sangat titik. Dalam kebanyakan kes, sumber cahaya laser digunakan sebagai sumber cahaya untuk mikroskop confocal. Di samping itu, ciri-ciri monokromatik, arah dan bentuk pancaran laser yang sangat baik juga merupakan sebab penting untuk penggunaannya yang meluas.
4. Pemerhatian masa nyata berdasarkan pengimbasan berkelajuan tinggi menjadi mungkin
Untuk pengimbasan laser, arah mendatar menggunakan Deflektor Optik Akustik (elemen AO), dan arah menegak menggunakan cermin pengimbasan rasuk terkawal servo (cermin Servo Galvano). Memandangkan unit pesongan akusto-optik tidak mempunyai bahagian getaran mekanikal, ia boleh melakukan pengimbasan berkelajuan tinggi dan pemerhatian masa nyata pada skrin monitor adalah mungkin. Pengimejan berkelajuan tinggi ini adalah item yang sangat penting yang secara langsung mempengaruhi kelajuan pemfokusan dan pengambilan kedudukan.
5. Hubungan antara kedudukan fokus dan kecerahan
Dalam sistem optik confocal, kecerahan sampel adalah maksimum apabila sampel diletakkan dengan betul dalam kedudukan fokus, dan kecerahannya akan berkurangan dengan mendadak sebelum dan selepasnya (garisan pepejal dalam Rajah 4). Selektiviti sensitif satah fokus juga merupakan prinsip penentuan arah ketinggian mikroskop confocal dan pengembangan kedalaman fokus. Sebaliknya, mikroskop optik biasa tidak mempunyai perubahan kecerahan yang jelas sebelum dan selepas kedudukan fokus
6. Kontras tinggi, resolusi tinggi
Dalam mikroskop optik biasa, disebabkan oleh gangguan cahaya yang dipantulkan dari bahagian fokus, ia bertindih dengan bahagian pengimejan fokus, mengakibatkan pengurangan kontras imej. Sebaliknya, dalam sistem optik confocal, cahaya berselerak di luar titik fokus dan cahaya berselerak di dalam kanta objektif hampir dikeluarkan sepenuhnya, supaya imej dengan kontras yang sangat tinggi boleh diperolehi. Di samping itu, kerana cahaya melalui kanta objektif dua kali, imej titik diasah terlebih dahulu, yang juga meningkatkan kuasa penyelesaian mikroskop.
7. Fungsi penyetempatan optik
Dalam sistem optik confocal, cahaya yang dipantulkan selain daripada titik bertepatan dengan titik fokus dilindungi oleh mikropori. Oleh itu, apabila memerhati sampel tiga dimensi, imej terbentuk seolah-olah sampel itu dihiris dengan satah fokus. Kesan ini dikenali sebagai penyetempatan optik dan merupakan salah satu keistimewaan sistem optik confocal.
8. Fokus fungsi memori mudah alih
Apa yang dipanggil cahaya yang dipantulkan di luar titik fokus dilindungi oleh mikropori. Sebaliknya, boleh dianggap bahawa semua titik pada imej yang dibentuk oleh sistem optik confocal bertepatan dengan titik fokus. Oleh itu, jika sampel tiga dimensi digerakkan sepanjang paksi Z (paksi optik), imej terkumpul dan disimpan dalam ingatan, dan akhirnya imej yang dibentuk oleh keseluruhan sampel dan titik fokus akan diperolehi. Fungsi mendalamkan kedalaman fokus secara tak terhingga dengan cara ini dipanggil fungsi ingatan mudah alih.
9. Fungsi pengukuran bentuk permukaan
Dari segi fungsi peralihan fokus, bentuk permukaan sampel boleh diukur bukan sentuhan dengan menambah litar rakaman ketinggian permukaan. Berdasarkan fungsi ini, adalah mungkin untuk merekodkan koordinat paksi-Z yang dibentuk oleh nilai pencahayaan maksimum dalam setiap piksel, dan berdasarkan maklumat ini, maklumat yang berkaitan dengan bentuk permukaan sampel boleh diperolehi.
10. Fungsi pengukuran saiz mikro berketepatan tinggi
Unit penerima cahaya menggunakan 1-penderia pengimejan CCD dimensi, jadi ia tidak terjejas oleh kecondongan pengimbasan peranti pengimbasan, supaya pengukuran ketepatan tinggi dapat diselesaikan. Di samping itu, disebabkan penggunaan fungsi memori peralihan fokus dengan kedalaman fokus boleh laras (mendalam), ralat pengukuran yang disebabkan oleh peralihan fokus boleh dihapuskan.
11. Analisis imej tiga dimensi
Menggunakan fungsi ukuran bentuk permukaan, anda boleh mencipta imej tiga dimensi permukaan sampel dengan mudah. Bukan itu sahaja, tetapi juga boleh melakukan pelbagai analisis seperti: ukuran kekasaran permukaan, luas, isipadu, luas permukaan, pekeliling, jejari, panjang maksimum, perimeter, pusat graviti, imej tomografi, transformasi FFT, ukuran lebar garisan, dll. .
Mikroskop pengimbasan confocal laser boleh digunakan bukan sahaja untuk memerhati morfologi sel, tetapi juga untuk analisis kuantitatif komponen biokimia intraselular, statistik ketumpatan optik dan pengukuran morfologi sel.
