Pengetahuan tentang mikroskop pendarfluor confocal
Prinsip asas mikroskop pendarfluor confocal: Gunakan sumber cahaya titik untuk menerangi spesimen untuk membentuk titik cahaya yang kecil dan jelas pada satah fokus. Pendarfluor yang dipancarkan oleh tempat selepas diterangi dikumpulkan oleh kanta objektif dan dikembalikan ke cermin dichroic di sepanjang laluan cahaya pencahayaan asal. membentuk pembahagi rasuk. Spektrometer menghantar pendarfluor terus ke pengesan. Terdapat lubang jarum di hadapan sumber cahaya dan pengesan, yang masing-masing dipanggil lubang jarum pencahayaan dan lubang jarum pengesan. Dimensi geometri kedua-duanya adalah konsisten, kira-kira 100-200nm; berbanding dengan titik cahaya pada satah fokus, kedua-duanya adalah konjugat, iaitu titik cahaya melalui satu siri kanta dan akhirnya boleh difokuskan pada lubang jarum pencahayaan dan lubang jarum pengesanan pada masa yang sama. Dengan cara ini, cahaya dari satah fokus boleh tertumpu dalam julat lubang pengesanan, manakala cahaya bertaburan dari atas atau bawah satah fokus disekat di luar lubang pengesanan dan tidak boleh diimej. Sampel diimbas titik demi titik dengan laser, dan tiub photomultiplier di belakang lubang jarum pengesanan juga memperoleh imej confocal bagi titik cahaya titik demi titik yang sepadan, yang ditukar menjadi isyarat digital dan dihantar ke komputer, dan akhirnya diagregatkan pada skrin menjadi imej konfokal yang jelas bagi keseluruhan satah fokus. .
Setiap imej satah fokus sebenarnya adalah keratan rentas optik spesimen. Keratan rentas optik ini sentiasa mempunyai ketebalan tertentu dan juga dipanggil keratan nipis optik. Oleh kerana keamatan cahaya pada fokus adalah jauh lebih besar daripada keamatan cahaya pada bukan fokus, dan cahaya satah bukan fokus ditapis oleh lubang jarum, kedalaman medan sistem confocal adalah lebih kurang sifar. Mengimbas sepanjang arah paksi Z boleh merealisasikan tomografi optik, membentuk yang dikehendaki Perhatikan bahagian optik dua dimensi di tempat fokus sampel. Dengan menggabungkan pengimbasan satah XY (satah fokus) dengan paksi Z (paksi optik), dengan mengumpul tahap berterusan imej dua dimensi dan memprosesnya dengan perisian komputer khusus, imej tiga dimensi sampel boleh diperolehi.
Iaitu, lubang jarum pengesanan dan lubang jarum sumber cahaya sentiasa tertumpu pada titik yang sama, supaya pendarfluor yang teruja di luar satah fokus tidak boleh memasuki lubang jarum pengesanan.
Ungkapan mudah prinsip kerja laser confocal ialah ia menggunakan laser sebagai sumber cahaya. Berdasarkan pengimejan mikroskop pendarfluor tradisional, peranti pengimbasan laser dan peranti pemfokus konjugat ditambah, dan sistem dikawal oleh komputer untuk mengumpul dan memproses imej digital.
