Perbandingan dan Ciri Mikroskop Pendarfluor dan Mikroskop Optik Konvensional
Mikroskop pendarfluor berbeza daripada mikroskop optik biasa. Daripada memerhati spesimen di bawah pencahayaan daripada sumber cahaya konvensional, ia menggunakan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (biasanya cahaya ultraungu atau biru-ungu) untuk merangsang bahan pendarfluor dalam spesimen, menyebabkan ia mengeluarkan pendarfluor. Oleh itu, sumber cahaya mikroskop pendarfluor tidak berfungsi untuk pencahayaan langsung; ia bertindak sebagai sumber tenaga untuk merangsang bahan pendarfluor endogen dalam spesimen. Kami dapat memerhati spesimen bukan kerana pencahayaan dari sumber, tetapi disebabkan oleh pendarfluor yang dipancarkan oleh bahan pendarfluor dalam spesimen selepas menyerap cahaya pengujaan.
Ia berikutan bahawa ciri utama mikroskop pendarfluor ialah sumber cahayanya, yang boleh membekalkan cahaya pengujaan yang banyak dalam julat panjang gelombang tertentu untuk memberikan keamatan pengujaan yang mencukupi untuk bahan pendarfluor dalam spesimen ujian. Sementara itu, mikroskop pendarfluor mesti dilengkapi dengan sistem penapis yang sepadan. Sebagai alat penting untuk histokimia pendarfluor, ia terutamanya terdiri daripada sumber cahaya tekanan ultra tinggi, set penapis (termasuk penapis pengujaan dan penapis penghalang), sistem optik dan sistem fotografi. Ia berfungsi dengan spesimen yang menarik dengan cahaya dengan panjang gelombang tertentu untuk menghasilkan pendarfluor.
Kaedah pengujaan pendarfluor: Dikelaskan mengikut julat panjang gelombang kepada pengujaan UV (kaedah pencahayaan ultraungu) dan pengujaan BV (kaedah cahaya biru-ungu). Pengujaan UV menggunakan cahaya ultraungu hampir lebih pendek daripada 400 nm untuk pengujaan. Tiada cahaya pengujaan yang boleh dilihat terlibat, jadi pendarfluor yang diperhatikan menunjukkan pendarfluor yang wujud bagi pewarna. Ini memudahkan untuk membezakan pendarfluor khusus pada spesimen daripada autofluoresensi tisu latar belakang.
Kaedah pengujaan BV: Pengujaan dilakukan dengan cahaya antara ultraungu kepada cahaya biru, berpusat pada 404 nm dan 434 nm. Memandangkan cahaya biru menyinari spesimen dalam kaedah ini, penapis potong sistem cerapan pendarfluor mesti menyekat sepenuhnya cahaya biru sambil menghantar sepenuhnya pendarfluor hijau dan kuning yang diperlukan. Kaedah ini digunakan untuk fluorokrom yang digunakan dalam teknik antibodi pendarfluor. Panjang gelombang penyerapan maksimum cahaya pengujaan dan panjang gelombang pancaran maksimum pendarfluor adalah agak dekat, jadi penapis potong tajam diperlukan untuk pengujaan BV. Cahaya biru digunakan sebagai cahaya pengujaan di sini, yang membawa kecekapan penyerapan fluorochromes yang tinggi dan menghasilkan imej yang lebih terang. Kelemahannya ialah pendarfluor di bawah 500 nm tidak dapat dikesan, dan isyarat di atas 500 nm memberikan keseluruhan imej warna kuning. Dalam ujian antibodi pendarfluor, kekhususan kebanyakannya dinilai oleh warna ciri fluorokrom. Oleh itu, apabila menilai kekhususan halus, kelemahan kaedah pengujaan BV di atas boleh memberi kesan yang ketara.
