Perbandingan mikroskop confocal dan mikroskop optik biasa
Mikroskop adalah alat utama untuk memerhati sel. Bergantung kepada sumber cahaya, ia boleh dibahagikan kepada dua kategori: mikroskop optik dan mikroskop elektron. Yang pertama menggunakan cahaya yang boleh dilihat (mikroskop ultraungu hingga cahaya ultraviolet) sebagai sumber cahaya, manakala yang kedua menggunakan pancaran elektron sebagai sumber cahaya. Mikroskop optik biasa dan mikroskop laser confocal tergolong dalam mikroskop optik yang sama.
I. Mikroskop Optik Am
Mikroskop biologi biasa terdiri daripada tiga bahagian, iaitu: ① sistem pencahayaan, termasuk sumber cahaya dan pemeluwap; ② sistem pembesaran optik, yang terdiri daripada objektif dan kanta mata, adalah badan utama mikroskop, untuk menghapuskan penyimpangan sfera dan penyimpangan kromatik, kanta mata dan objektif terdiri daripada kumpulan kanta yang kompleks; ③ peranti mekanikal, digunakan untuk menetapkan bahan dan pemerhatian kemudahan.
Objek mikroskop jelas bukan sahaja ditentukan oleh pembesaran, tetapi juga dengan kuasa penyelesaian mikroskop (resolusi), kuasa penyelesaian merujuk kepada mikroskop (atau mata manusia dari sasaran 25cm) boleh membezakan objek zui selang kecil keupayaan untuk membezakan saiz kuasa penyelesaian ditentukan oleh panjang gelombang cahaya dan kadar mulut cermin dan indeks biasan medium, dinyatakan dalam formula:
R=0.61λ /NANA=nsin /2 di mana: n=indeks biasan medium;=sudut mulut cermin (spesimen pada mulut kanta objektif sudut tegangan), NA=kadar mulut cermin (apertur angka). Sudut mulut cermin sentiasa kurang daripada 180?, jadi nilai zui sina/2 semestinya kurang daripada 1.
Indeks biasan kaca yang digunakan dalam pengeluaran kanta optik ialah 1.65 ~ 1.78, indeks biasan medium digunakan lebih dekat dengan kaca lebih baik. Untuk kanta objektif kering, medium untuk udara, kadar mulut cermin biasanya 0.05 ~ 0.95; kanta minyak dengan minyak cedar sebagai medium, kadar mulut cermin boleh hampir 1.5.
Panjang gelombang cahaya biasa 400~700nm, jadi nilai kuasa penyelesaian mikroskop tidak akan kurang daripada 0.2μm, kuasa penyelesaian mata manusia ialah 0.2mm, jadi reka bentuk umum pembesaran mikroskop zui biasanya 1000X.
Kedua, mikroskop pengimbasan confocal laser
Mikroskop pengimbasan confocal laser (mikroskop pengimbasan confocal laser), dengan laser sebagai sumber cahaya pengimbasan, titik demi titik, baris demi baris, pengimejan pengimbasan pantas permukaan demi permukaan, laser pengimbasan dan pengumpulan pendarfluor objektif bersama, titik fokus laser pengimbasan objektif , tetapi juga pengimejan serta-merta bagi titik objek. Oleh kerana panjang gelombang pancaran laser yang lebih pendek, pancaran itu sangat halus, jadi mikroskop pengimbasan laser confocal mempunyai resolusi tinggi, kira-kira 3 kali ganda daripada mikroskop optik biasa. Sistem difokuskan sekali dan imbasan terhad kepada satu satah sampel. Apabila kedalaman pemfokusan tidak sama, imej tahap kedalaman berbeza sampel boleh diperolehi, dan maklumat imej ini disimpan dalam komputer, melalui analisis dan simulasi komputer, ia boleh menunjukkan struktur tiga dimensi sampel sel. .
