Pengetahuan mikroskop pendarfluor konfokal
Prinsip asas mikroskop pendarfluor confocal: sumber cahaya titik digunakan untuk menyinari spesimen, membentuk titik cahaya yang kecil dan jelas pada satah fokus; pendarfluor yang dipancarkan dari titik ini selepas penyinaran dikumpulkan oleh kanta objektif dan dihantar semula di sepanjang laluan cahaya penyinaran asal ke pemisah rasuk yang terdiri daripada cermin kromatik dua arah. Pembahagi rasuk menghantar pendarfluor terus ke pengesan. Kedua-dua sumber cahaya dan pengesan masing-masing mempunyai lubang jarum di hadapannya, masing-masing dipanggil lubang jarum pencahayaan dan lubang jarum pengesanan. Kedua-duanya mempunyai geometri yang sama, kira-kira 100-200 nm, dan konjugat berkenaan dengan titik cahaya pada satah fokus, iaitu, titik cahaya melalui satu siri kanta dan akhirnya boleh difokuskan pada kedua-dua penerang. dan lubang jarum pengesan. Dengan cara ini, cahaya dari satah fokus boleh menumpu dalam apertur probe, manakala cahaya bertaburan dari atas atau bawah satah fokus disekat di luar apertur probe dan tidak boleh diimej. Laser mengimbas titik sampel demi titik, dan tiub photomultiplier selepas mengesan lubang jarum juga memperoleh imej confocal bagi titik titik cahaya yang sepadan dengan titik, yang ditukar menjadi isyarat digital dan dihantar ke komputer, dan akhirnya menumpu menjadi jelas. imej confocal bagi keseluruhan satah fokus pada skrin.
Setiap imej satah fokus sebenarnya adalah keratan rentas optik spesimen, dan keratan rentas optik ini sentiasa mempunyai ketebalan tertentu, juga dikenali sebagai helaian optik. Memandangkan keamatan cahaya pada titik fokus jauh lebih besar daripada di titik bukan fokus, dan cahaya satah bukan fokus ditapis keluar oleh lubang jarum, kedalaman medan sistem confocal dianggarkan menjadi sifar, dan pengimbasan sepanjang arah paksi Z membolehkan tomografi optik membentuk kepingan optik dua dimensi spesimen untuk diperhatikan di tempat fokus. Menggabungkan pengimbasan satah XY (satah fokus) dengan pengimbasan paksi Z (paksi optik), imej tiga dimensi sampel boleh diperolehi dengan mengumpul lapisan berturut-turut imej dua dimensi, yang diproses oleh perisian komputer khusus.
Ini bermakna lubang jarum pengesanan dan lubang jarum sumber cahaya sentiasa difokuskan pada titik yang sama, supaya pendarfluor yang teruja di luar satah fokus tidak boleh memasuki lubang jarum pengesanan.
Prinsip kerja laser confocal secara ringkas dinyatakan bahawa ia menggunakan laser sebagai sumber cahaya, berdasarkan pengimejan mikroskop pendarfluor tradisional, peranti pengimbasan laser tambahan dan peranti pemfokus konjugat, melalui kawalan komputer untuk menjalankan sistem pemerolehan dan pemprosesan imej digital.
