Penentuan bilangan mikroorganisma-Kaedah pengiraan langsung mikroskopik!
Pertumbuhan populasi bakteria dimanifestasikan oleh pertambahan bilangan sel atau pertambahan bahan selular. Kaedah untuk menentukan bilangan sel termasuk kiraan mikroskopik langsung, kiraan plat, anggaran kekeruhan dengan spektrofotometer, nombor paling berkemungkinan MPN dan penapisan membran. (penapisan membran) dsb. Kaedah untuk mengukur bahan selular termasuk penentuan berat kering sel, penentuan komponen sel tertentu seperti kandungan nitrogen, kandungan RNA dan DNA, dan penentuan produk metabolit. Ringkasnya, terdapat banyak kaedah untuk mengukur pertumbuhan mikrob, masing-masing mempunyai kelebihan dan kekurangannya sendiri. Kaedah harus dipilih mengikut keperluan khusus kerja. Eksperimen ini terutamanya memperkenalkan kaedah pengiraan terus mikroskop yang biasa digunakan dalam kerja-kerja pengeluaran dan penyelidikan saintifik.
1. Keperluan tujuan
1. Jelaskan prinsip mengira dengan papan pengiraan sel darah.
2. Menguasai kaedah mengira mikroorganisma menggunakan papan pengiraan sel darah.
2. Prinsip asas
Kaedah pengiraan terus mikroskop ialah kaedah mudah, pantas dan intuitif yang meletakkan sejumlah kecil ampaian sampel untuk diuji pada slaid khas dengan kawasan dan isipadu yang ditentukan (juga dipanggil bacteriometer) dan mengiranya terus di bawah mikroskop. Kaedah. Pada masa ini, bakteriometer yang biasa digunakan di dalam dan luar negara termasuk: hemocytometer, Peteroff-Hauser bacteriometer, dan Hawksley bacteriometer, dsb. Mereka semua boleh digunakan untuk mengira yis, bakteria, spora acuan dan penggantungan lain, dan prinsip asasnya adalah sama. Dua pembilang bakteria yang terakhir mempunyai jumlah isipadu 0.02mm3 selepas ditutup dengan kaca penutup, dan jarak antara kaca penutup dan slaid hanya 0.02mm. Oleh itu, kanta objektif rendaman minyak boleh digunakan untuk memerhati dan mengesan sel yang lebih kecil seperti bakteria. kira. Selain menggunakan bacteriometer ini, terdapat juga kaedah anggaran yang memerhatikan secara langsung nisbah kawasan smear dengan luas medan visual di bawah mikroskop. Kaedah ini biasanya digunakan untuk pemeriksaan bakteriologi susu. Kelebihan kaedah pengiraan terus mikroskop ialah ia intuitif, cepat dan mudah dikendalikan. Walau bagaimanapun, kelemahan kaedah ini ialah hasil yang diukur biasanya jumlah bakteria mati dan bakteria hidup. Pada masa ini terdapat beberapa kaedah untuk mengatasi kelemahan ini, seperti menggabungkan bakteria berdaya maju yang mengotorkan kultur ruang mikro (masa yang singkat) dan menambah perencat pembahagian sel untuk mencapai tujuan mengira hanya bakteria yang berdaya maju.
Eksperimen ini menggunakan hemositometer sebagai contoh untuk menjalankan pengiraan terus di bawah mikroskop. Untuk penggunaan dua bacteriometer yang lain, sila rujuk kepada arahan setiap pengeluar. Pengiraan terus di bawah mikroskop menggunakan hemositometer ialah kaedah penghitungan mikrob yang biasa digunakan. Papan pengiraan adalah slaid khas dengan empat alur membentuk tiga platform; platform yang lebih luas di tengah dibahagikan kepada dua bahagian oleh alur mendatar pendek, dan terdapat grid grid pada setiap sisi platform. Setiap grid segi empat sama dibahagikan kepada sembilan petak besar, dan petak besar di tengah ialah bilik mengira. Struktur papan pengiraan sel darah ditunjukkan dalam Rajah {{0}}. Secara amnya terdapat dua spesifikasi untuk skala ruang pengiraan. Satu ialah segi empat sama besar dibahagikan kepada 25 petak sederhana, dan setiap petak sederhana dibahagikan kepada 16 petak kecil (Rajah 15-2); satu lagi adalah segi empat sama besar. Grid segi empat sama dibahagikan kepada 16 petak sederhana, dan setiap petak sederhana dibahagikan kepada 25 petak kecil. Walau bagaimanapun, tidak kira apa jenis papan pengiraan itu, terdapat 400 petak kecil dalam setiap petak besar. Panjang sisi setiap petak besar ialah lmm, maka luas setiap petak besar ialah lmm2. Selepas slip penutup ditutup, ketinggian antara slip penutup dan slaid ialah 0.lmm, jadi isipadu ruang pengiraan ialah 0.lmm3 (satu persepuluh ribu mililiter). Rajah 15-1 Struktur papan pengiraan sel darah (1) Rajah 15-2 Struktur papan pengiraan sel darah (2) A. Pandangan hadapan; B. Bahagian membujur; grid persegi diperbesarkan, persegi besar di tengah adalah ruang pengiraan 1. Sel darah Papan pengiraan; 2. Slip penutup; 3. Apabila mengira dalam ruang pengiraan, biasanya kira jumlah bilangan bakteria dalam lima petak, kemudian cari nilai purata bagi setiap petak, dan kemudian darab dengan 25 atau 16 untuk mendapatkan Jumlah bilangan bakteria dalam petak besar kemudian ditukar ke dalam jumlah bilangan bakteria dalam 1ml larutan bakteria. Katakan jumlah bilangan bakteria dalam lima petak tengah ialah A, dan faktor pencairan larutan bakteria ialah B. Jika ia adalah plat pengira dengan 25 petak tengah, maka jumlah bilangan bakteria dalam 1mL larutan bakteria {{ 23}} A/5×25×104× B=50000A·B (keping) Dengan cara yang sama, jika ia adalah plat pengiraan dengan 16 petak, jumlah bilangan bakteria dalam 1mL larutan bakteria {{ 30}}A/5×16×104×B=32000A·B (keping),,
