Perbezaan dan ciri antara mikroskop pendarfluor dan mikroskop optik biasa
Mikroskop pendarfluor berbeza daripada mikroskop optik biasa. Ia tidak memerhati spesimen melalui pencahayaan sumber cahaya biasa. Sebaliknya, ia menggunakan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (biasanya cahaya ultraungu, cahaya biru-ungu) untuk merangsang bahan pendarfluor dalam spesimen di bawah mikroskop, menyebabkan ia mengeluarkan pendarfluor. Oleh itu, Sumber cahaya mikroskop pendarfluor tidak berfungsi sebagai pencahayaan langsung, tetapi sebagai sumber tenaga yang mengujakan bahan pendarfluor dalaman spesimen. Sebab mengapa kita boleh memerhati spesimen bukan disebabkan oleh pencahayaan sumber cahaya, tetapi fenomena pendarfluor yang disebabkan oleh bahan pendarfluor dalam spesimen menyerap tenaga cahaya teruja. Ia boleh dilihat bahawa ciri utama mikroskop pendarfluor ialah sumber cahayanya boleh membekalkan sejumlah besar cahaya pengujaan dalam julat panjang gelombang tertentu, supaya bahan pendarfluor dalam spesimen yang diperiksa boleh mendapatkan keamatan cahaya pengujaan yang diperlukan. Pada masa yang sama, mikroskop pendarfluor mesti mempunyai sistem penapis yang sepadan. Mikroskopi pendarfluor ialah alat penting untuk histokimia pendarfluor lanjutan. Ia terdiri daripada sumber cahaya tekanan ultra tinggi, sistem penapis (termasuk plat penapis pengujaan dan penindasan), sistem optik dan sistem fotografi. Ia menggunakan cahaya dengan panjang gelombang tertentu untuk merangsang spesimen untuk memancarkan pendarfluor.
1. Cara untuk merangsang pendarfluor: Mengikut julat panjang gelombang cahaya, ia dibahagikan kepada dua jenis: kaedah pengujaan UV (menggunakan kaedah pencahayaan ultraviolet) dan kaedah pengujaan BV (menggunakan cahaya biru-ungu). Kaedah pengujaan UV menggunakan cahaya ultraungu hampir lebih pendek daripada 400nm untuk pengujaan. Tiada cahaya pengujaan yang boleh dilihat dalam kaedah ini, jadi pendarfluor yang diperhatikan menunjukkan pendarfluor yang wujud bagi pewarna, menjadikannya mudah untuk membezakan pendarfluor khusus pada spesimen daripada autopendarfluor tisu latar belakang.
2. Kaedah pengujaan BV: pengujaan dari ultraungu kepada cahaya biru berpusat pada 404nm dan 434nm. Kaedah ini menggunakan cahaya biru untuk menerangi spesimen, jadi penapis potong sistem cerapan pendarfluor mesti menggunakan penapis yang boleh menyekat sepenuhnya cahaya biru dan melepasi sepenuhnya pendarfluor hijau dan kuning yang diperlukan. Pewarna pendarfluor yang digunakan dalam kaedah antibodi pendarfluor. Panjang gelombang penyerapan maksimum cahaya pengujaan dan panjang gelombang pancaran maksimum pendarfluor adalah agak rapat, jadi penapis yang digunakan dalam kaedah pengujaan BV mesti menggunakan penapis cutoff tajam. Kaedah ini boleh menggunakan cahaya biru sebagai cahaya pengujaan, jadi kecekapan penyerapan pigmen pendarfluor adalah lebih tinggi dan imej yang lebih terang boleh diperolehi. Kelemahannya ialah pendarfluor di bawah 500nm tidak dapat dilihat, manakala pendarfluor melebihi 500nm menjadikan keseluruhan imej kelihatan kuning. Dalam kaedah antibodi pendarfluor, kekhususan pewarna pendarfluor kebanyakannya dinilai oleh warnanya yang unik. Oleh itu, apabila membincangkan kekhususan halus, kelemahan kaedah pengujaan BV yang disebutkan di atas sering memberi impak yang besar.
