Aplikasi dan penggunaan prinsip mikroskop pendarfluor
(1) Prinsip dan ciri-ciri struktur mikroskop pendarfluor: mikroskop pendarfluor menggunakan sumber cahaya titik dengan kecekapan bercahaya tinggi untuk memancarkan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (seperti cahaya ultraungu 3650 in atau cahaya biru ungu 4200 in) melalui sistem penapis sebagai cahaya pengujaan untuk mengujakan spesimen. Selepas bahan pendarfluor di dalam mengeluarkan pendarfluor pelbagai warna, ia diperhatikan melalui pembesaran kanta objektif dan kanta mata. Dengan cara ini, di bawah latar belakang kontras yang kuat, walaupun pendarfluor sangat lemah, ia mudah dikenal pasti dan mempunyai sensitiviti yang tinggi. Ia digunakan terutamanya untuk penyelidikan struktur dan fungsi sel dan komposisi kimia. Struktur asas mikroskop pendarfluor terdiri daripada mikroskop optik biasa serta beberapa aksesori (seperti sumber cahaya pendarfluor, penapis pengujaan, pembahagi rasuk dua warna dan penapis penyekat, dsb.). Sumber cahaya pendarfluor - umumnya menggunakan lampu merkuri tekanan ultra tinggi (50-200W), yang boleh memancarkan cahaya pelbagai panjang gelombang, tetapi setiap bahan pendarfluor mempunyai panjang gelombang pengujaan yang menghasilkan pendarfluor terkuat, jadi penapis pengujaan ( Umumnya, terdapat penapis pengujaan ultraungu, ungu, biru dan hijau), yang hanya membenarkan cahaya pengujaan panjang gelombang tertentu melalui dan menyinari spesimen, sambil menyerap cahaya lain. Selepas setiap bahan disinari oleh cahaya pengujaan, ia mengeluarkan pendarfluor yang boleh dilihat dengan panjang gelombang yang lebih panjang daripada panjang gelombang penyinaran dalam masa yang sangat singkat. Pendarfluor adalah khusus dan umumnya lebih lemah daripada cahaya pengujaan. Untuk melihat pendarfluor tertentu, penapis menyekat (atau menekan) diperlukan di belakang kanta objektif. Ia mempunyai dua fungsi: satu adalah untuk menyerap dan menyekat cahaya pengujaan daripada memasuki kanta mata, supaya tidak mengganggu pendarfluor dan merosakkan mata; yang lain ialah memilih dan membiarkan pendarfluor tertentu melalui, menunjukkan warna pendarfluor tertentu. Kedua-dua penapis mesti digunakan bersama.
Terdapat dua jenis mikroskop pendarfluor dari segi laluan optiknya:
1. Mikroskop pendarfluor penghantaran: Sumber cahaya pengujaan disalurkan melalui bahan spesimen melalui kanta pemeluwap untuk mengujakan pendarfluor. Pengumpul medan gelap biasanya digunakan, dan pengumpul biasa juga boleh digunakan untuk melaraskan cermin supaya cahaya pengujaan dialihkan dan dipintas ke spesimen. Ini adalah mikroskop pendarfluor yang lebih tua. Kelebihannya ialah pendarfluor kuat pada pembesaran rendah, tetapi kelemahannya ialah pendarfluor berkurangan dengan peningkatan pembesaran. Oleh itu, adalah lebih baik untuk memerhatikan bahan spesimen yang lebih besar.
2. Mikroskop pendarfluor epi ialah sejenis mikroskop pendarfluor jenis baharu yang dibangunkan pada zaman moden. Perbezaannya ialah cahaya pengujaan jatuh dari kanta objektif ke permukaan spesimen, iaitu kanta objektif yang sama digunakan sebagai pemeluwap pencahayaan dan kanta objektif untuk mengumpul pendarfluor. Pembahagi rasuk dichroic perlu ditambah dalam laluan cahaya, iaitu 45 darjah dari uranium cahaya. Cahaya pengujaan dipantulkan ke dalam kanta objektif dan dikumpulkan pada sampel. Pendarfluor yang dihasilkan oleh sampel dan cahaya pengujaan yang dipantulkan oleh permukaan kanta kanta objektif dan permukaan kaca penutup memasuki kanta objektif pada masa yang sama, dan kembali ke pembahagi rasuk dua warna untuk membuat cahaya pengujaan Dipisahkan daripada pendarfluor , sisa cahaya pengujaan diserap dengan menyekat penapis. Seperti menukar kepada gabungan penapis pengujaan yang berbeza/pemecah rasuk dua warna/penapis penyekat, ia boleh memenuhi keperluan produk tindak balas pendarfluor yang berbeza. Kelebihan mikroskop pendarfluor jenis ini ialah pencahayaan bidang pandangan adalah seragam, pengimejan adalah jelas, dan semakin besar pembesaran, semakin kuat pendarfluor.
(2) Cara menggunakan mikroskop pendarfluor.
1. Hidupkan sumber cahaya, dan lampu merkuri tekanan ultra tinggi perlu memanaskan badan selama beberapa minit untuk mencapai titik paling terang.
2. Mikroskop pendarfluor penghantaran perlu memasang penapis pengujaan yang diperlukan antara sumber cahaya dan pemeluwap, dan memasang penapis penyekat yang sepadan di belakang kanta objektif. Mikroskop epi-pendarfluor perlu memasukkan penapis pengujaan yang diperlukan/pembahagi rasuk dwi-warna/pemasukan penapis penyekat ke dalam slot di laluan cahaya.
3. Perhatikan dengan kanta pembesaran rendah, dan laraskan pusat sumber cahaya supaya ia terletak di tengah-tengah keseluruhan tempat pencahayaan mengikut peranti pelarasan model mikroskop pendarfluor yang berbeza.
4. Letakkan kepingan spesimen dan perhatikan selepas memfokus. Perhatian harus dibayar semasa penggunaan: jangan perhatikan secara langsung dengan penapis akhir, supaya tidak menyebabkan kerosakan mata; apabila memerhati spesimen dengan kanta minyak, kanta minyak khas tanpa pendarfluor mesti digunakan; selepas lampu merkuri tekanan tinggi dimatikan, ia tidak boleh dihidupkan semula dengan segera, ia perlu diuji. Ia boleh dimulakan semula selepas 5 minit, jika tidak, ia akan menjadi tidak stabil dan menjejaskan hayat lampu merkuri.
(3) Perhatikan sel yang diwarnai dengan 0.01% pewarna pendarfluor oren acridine di bawah mikroskop pendarfluor pada pelantar pengajaran dengan penapis cahaya biru-ungu. Nukleus dan sitoplasma teruja untuk menghasilkan dua warna pendarfluor yang berbeza (hijau gelap dan oren-merah).
