Berapa Banyak Yang Anda Tahu Mengenai Mikroskopi Pendarfluor
Mikroskop pendarfluor biasanya menggunakan lampu merkuri intensiti tinggi sebagai sumber cahaya pengujaan. Penapis digunakan untuk menapis cahaya yang tidak diingini, hanya meninggalkan cahaya tulen intensiti tinggi yang merangsang fluorophore. Selepas cahaya monokromatik menyinari sampel melalui kanta objektif, sampel akan teruja untuk memancarkan cahaya (pendarfluor), dan kedua-dua pendarfluor dan cahaya pengujaan akan kembali di sepanjang laluan optik kanta objektif. Dalam kes ini, cermin dichroic diperlukan untuk menapis cahaya pengujaan. , membiarkan hanya pendarfluor yang perlu kita lihat.
Pendarfluor ini mencapai kanta mata di sepanjang laluan cahaya mikroskop, dan kemudian memasuki mata kita, di mana kita boleh melihat pendarfluor yang dipancarkan oleh fluorophore.
Praperiksa dan pelarasan mikroskop pendarfluor:
(1) Sebelum setiap pemerhatian pendarfluor, adalah perlu untuk memeriksa secara rutin penjajaran filamen, fokus laluan optik, diafragma apertur, dan tetapan diafragma medan peranti pendarfluor.
(2) Sama ada pemasangan penapis pengujaan/pelepasan pendarfluor yang diperlukan telah dipasang dalam penukar, sama ada kanta objektif mikroskop pendarfluor dikonfigurasikan dengan betul, dan keluarkan kotoran minyak dan habuk pada kanta hadapan kanta objektif.
(3) Jika pemerhatian kontras fasa cahaya yang dihantar dijalankan pada masa yang sama, adalah perlu untuk memeriksa konjugasi pusat pemeluwap dan cincin kontras fasa bertentangan dengan kanta objektif.
(4) Periksa sama ada pembawa sampel (gelas slaid, kaca penutup dan perkakas lain) ditutup dengan cecair atau habuk, dan sama ada ketebalannya berada dalam julat jarak kerja yang ditentukur bagi kanta objektif. Sampel yang dihiris tidak boleh terlalu tebal, sebaik-baiknya Kurang daripada atau sama dengan 10 μm.
(5) Oleh kerana sumber pencahayaan mengandungi sinaran ultraungu, plat pelindung cahaya berwarna coklat diletakkan di atas bahagian hadapan pentas untuk mengelakkan sinaran ultraungu daripada merosakkan retina.
(6) Ketidakstabilan voltan akan mengurangkan hayat perkhidmatan lampu merkuri tekanan tinggi, dan bekalan kuasa sumber cahaya dilengkapi dengan penstabil voltan.
(7) Untuk memanjangkan hayat lampu merkuri, ia boleh dimatikan 15 minit selepas ia dihidupkan; sebaik sahaja kuasa pendarfluor lampu merkuri dimatikan, ia perlu menunggu sekurang-kurangnya 10 minit untuk memulakan semula wap merkuri untuk menyejukkan dan kembali ke keadaan asal, jika tidak, hayat lampu akan terjejas.
Pemerhatian imej oleh mikroskop pendarfluor:
(1) Kira-kira 5-10 minit selepas menghidupkan sumber cahaya pendarfluor, keamatan cahaya pengujaan cenderung menjadi stabil, dan sampel dimuatkan untuk pemerhatian; untuk mengelakkan pelindapkejutan pendarfluor sampel yang disebabkan oleh cahaya pengujaan yang berlebihan semasa proses memfokus dan mencari objek, mula-mula zum keluar mikroskop pendarfluor Laraskan cahaya pengujaan kepada intensiti sederhana dengan diafragma apertur atau tambah penapis ND, dan gerakkan peringkat sampel dengan kerap. Selepas mengesahkan imej cermin, laraskan kepada keadaan pendarfluor untuk menangkap dan merakam.
(2) Pelarasan untuk kualiti imej yang lemah. Sebagai tambahan kepada faktor penyediaan sampel, pelarasan perlu yang boleh dibuat ialah:
① Kecualikan peranti pelindung cahaya atau pengehad cahaya dalam laluan optik pengimejan, seperti aksesori DIC, penapis ND, dsb.
②Laraskan semula fokus penerima dan saiz diafragma apertur mikroskop pendarfluor.
③ Laraskan gelang pembetulan perbezaan liputan dengan teliti bagi kanta objektif mikroskop pendarfluor.
Titik Aplikasi Mikroskopi Pendarfluor
Mikroskopi pendarfluor menggunakan pengimejan "pendarfluor aktinik". Jika panjang gelombang pengujaan yang dipilih berada dalam kawasan berhampiran ultraungu (320-400nm), yang tidak dapat dilihat dengan mata kasar, spektrum pancaran pendarfluor juga lebih pendek daripada panjang gelombang purata sumber cahaya cermin cahaya biasa. bertambah baik. Foton bertenaga tinggi berlanggar dengan elektron, menyebabkan elektron beralih dari keadaan dasar ke keadaan teruja. Elektron dalam keadaan teruja sangat tidak stabil dan akan jatuh semula ke keadaan dasar. Dalam proses ini, sebahagian daripada tenaga haba akan digunakan dan foton baru akan dipancarkan. Foton baru mempunyai tenaga yang lebih rendah daripada foton asal dan oleh itu mempunyai panjang gelombang yang lebih panjang. Oleh kerana panjang gelombang foton baru adalah berbeza daripada panjang gelombang foton cahaya kejadian, kedua-dua pancaran cahaya dengan panjang gelombang yang berbeza dipisahkan oleh kaedah pemprosesan optik tertentu, supaya kita hanya melihat foton baru yang dipancarkan (isyarat pendarfluor), iaitu, mikroskop pendarfluor melihat imej pendarfluor.
