Ciri dan Aplikasi Mikroskop Konfokal Laser
Semasa dalam mikroskop biasa, satah imej pemerhatian diasingkan daripada satah paksi jiran dengan bertindih satah fokus kanta objektif dengan pengesan, dalam mikroskop confocal pengasingan ini dicapai dengan menerangi sampel dengan titik terhad pembelauan. cahaya dan menapis cahaya sesat dengan menggunakan lubang jarum di laluan cahaya terkumpul pada fokus konjugat titik cahaya ini untuk mencapai pengasingan ini dan dengan itu meningkatkan resolusi.
Hanya cahaya yang dipantulkan kembali dari lapisan sampel konjugat boleh melalui lubang jarum dalam laluan cahaya pengumpulan, manakala selebihnya pantulan lapisan sampel yang tidak berkaitan disekat oleh lubang jarum. Ini memberikan peningkatan yang ketara dalam resolusi. Ditunjukkan di bawah ialah perbandingan sebelah menyebelah mikroskop pendarfluor multidimensi dan mikroskopi confocal bagi sampel tebal yang sama. Apabila satu siri imej diambil pada satah fokus yang berbeza, imej yang biasanya dirujuk sebagai "tindanan z" dihasilkan, yang menunjukkan resolusi dan keuntungan kontras yang disediakan oleh mikroskop confocal dan sebab asas untuk keuntungan ini. Ia boleh dilihat bahawa memeriksa imej di bahagian atas timbunan di mana satah pengimejan berada di atas tisu mendedahkan sejumlah besar cahaya bertaburan dalam imej pendarfluor, manakala imej mikroskop confocal kelihatan hitam. Pengurangan PSF dalam arah paksi ini secara langsung menyumbang kepada perbezaan resolusi yang diperhatikan pada antara muka optik di tengah-tengah timbunan z.
Pengimejan pengimbasan kepingan optik
Satu lagi ciri mikroskopi confocal pengimbasan laser ialah ia adalah teknik pengimejan pengimbasan. Teknik pencahayaan medan lebar tradisional menerangi keseluruhan sampel supaya imej boleh ditangkap secara langsung oleh mata kasar atau pengesan, tetapi LSCM menggunakan satu atau lebih pancaran cahaya terfokus untuk mengimbas melalui sampel, supaya imej yang terhasil dipanggil kepingan optik, seperti yang ditunjukkan dalam rajah berikut. Perbezaan antara pencahayaan medan lebar tradisional dan pencahayaan confocal pengimbasan laser ditunjukkan di bawah.
Oleh itu, cara praktikal mikroskop confocal moden ditunjukkan dalam rajah di bawah. Cahaya pengujaan daripada laser disalurkan melalui cermin dichroic dan diimbas melalui sepasang cermin galvanometer dalam arah x dan arah y sampel, dan pengujaan (atau pantulan) sampel melalui lubang jarum ke dalam PMT. pengesan untuk dirakam, dan imej imbasan yang dirakam dibina semula oleh komputer untuk menghasilkan imej sebenar sampel.
