Prinsip dan Ciri Struktur Mikroskop Pendarfluor
Sumber cahaya pendarfluor umumnya menggunakan lampu merkuri tekanan ultra tinggi (50–200 W), yang memancarkan cahaya pelbagai panjang gelombang. Walau bagaimanapun, setiap bahan pendarfluor mempunyai panjang gelombang pengujaan tertentu yang menghasilkan pendarfluor sengit. Atas sebab ini, penapis pengujaan (biasanya tersedia dalam jenis ultraungu, ungu, biru dan hijau) diperlukan untuk membenarkan hanya cahaya pengujaan panjang gelombang tertentu melalui dan menyinari spesimen, sambil menyerap semua panjang gelombang lain.
Apabila disinari oleh cahaya pengujaan, setiap bahan memancarkan pendarfluor yang boleh dilihat dengan panjang gelombang yang lebih panjang daripada cahaya pengujaan dalam masa yang sangat singkat. Pendarfluor adalah sangat spesifik dan umumnya lebih lemah daripada cahaya pengujaan. Untuk memerhatikan pendarfluor khusus ini, penapis penghalang (atau penindasan) mesti dipasang di belakang kanta objektif. Ia mempunyai dua tujuan: pertama, ia menyerap dan menyekat cahaya pengujaan daripada memasuki kanta mata untuk mengelak daripada mengganggu pemerhatian pendarfluor dan merosakkan mata; kedua, ia secara selektif menghantar pendarfluor tertentu untuk menghasilkan warna pendarfluor yang berbeza. Kedua-dua jenis penapis mesti dipilih dan digunakan dalam pasangan yang sepadan.
Mikroskop pendarfluor dibahagikan kepada dua jenis berdasarkan laluan optiknya:
1. Mikroskop Pendarfluor cahaya dihantar
Dalam reka bentuk ini, sumber cahaya pengujaan melalui pemeluwap dan bahan spesimen untuk merangsang pendarfluor. Pemeluwap medan gelap biasanya digunakan, walaupun pemeluwap standard juga boleh digunakan; cermin pemantul dilaraskan untuk mengubah hala dan menyinari sisi cahaya pengujaan ke spesimen. Ini adalah jenis mikroskop pendarfluor yang agak lama. Kelebihannya ialah pendarfluor kuat pada pembesaran rendah, manakala kelemahannya ialah keamatan pendarfluor berkurangan apabila pembesaran meningkat. Oleh itu, ia lebih sesuai untuk memerhati bahan spesimen yang lebih besar.
2. Mikroskop Epifluoresensi
Ini adalah jenis mikroskop pendarfluor moden yang baru dibangunkan. Tidak seperti reka bentuk cahaya dipancarkan, cahaya pengujaan dipancarkan ke bawah melalui kanta objektif ke permukaan spesimen - kanta objektif yang sama berfungsi sebagai pemeluwap pencahayaan dan objektif pengumpulan pendarfluor. Pemisah rasuk dichroic dipasang di laluan optik pada sudut 45 darjah ke paksi optik. Cahaya pengujaan dipantulkan ke dalam kanta objektif dan difokuskan pada sampel. Pendarfluor yang dijana oleh sampel, bersama-sama dengan cahaya pengujaan yang dipantulkan daripada permukaan kanta objektif dan slip penutup, secara serentak memasuki kanta objektif dan kembali ke pemisah rasuk dichroic, yang memisahkan cahaya pengujaan daripada pendarfluor. Baki cahaya pengujaan kemudiannya diserap oleh penapis penghalang.
Dengan menukar blok penapis dengan gabungan penapis pengujaan yang berbeza, pemisah rasuk dichroic dan penapis penghalang, keperluan untuk produk tindak balas pendarfluor yang berbeza boleh dipenuhi. Kelebihan mikroskop pendarfluor jenis ini termasuk pencahayaan medan seragam, pengimejan tajam, dan peningkatan intensiti pendarfluor pada pembesaran yang lebih tinggi.
