Keperluan untuk penyediaan sampel rutin untuk mikroskopi
Mikroskop confocal ialah produk baharu berteknologi tinggi membuat zaman yang dibangunkan pada tahun 1980-an, dan ia merupakan salah satu instrumen analisis penting dalam biologi molekul dan sains hayat hari ini. Mikroskopi konfokal adalah berdasarkan pengimejan mikroskop pendarfluor dengan peranti pengimbasan laser yang ditambah, menggunakan komputer untuk pemprosesan imej untuk mendapatkan imej pendarfluor mikrostruktur di dalam sel atau tisu, dan untuk memerhatikan perubahan dalam morfologi banyak mesin isyarat fisiologi pada peringkat subselular. Menjadi alat penyelidikan yang berkuasa dalam bidang morfologi, biologi sel molekul, neurosains, farmakologi, genetik dan bidang saintifik lain.
Penyediaan sampel untuk mikroskop confocal adalah langkah kritikal sebelum pengesanan. Sampel perlu dilabelkan dengan probe pendarfluor (tunggal, dua kali ganda, tiga kali ganda).
yang
Spesimen boleh tetap atau tisu hidup, atau tetap atau budaya melekat hidup. Sel hendaklah dikultur pada hidangan kultur kecil khas Confocal atau slip penutup. Gantung sel, goncang atau lepaskan kepingan, dan tutup dengan filem penutup slip penutup. Ketebalan Zda sampel adalah kira-kira 1~2mm, ketebalan kaca penutup yang digunakan hendaklah kurang daripada 0.17mm, dan ketebalan kaca slaid hendaklah antara 0.8~1.2 mm, dan permukaannya licin, ketebalannya seragam, dan tiada pendarfluor gangguan yang jelas. Medium pelekap sering digunakan untuk sampel tetap dan gliserol disediakan dalam PBS dengan pH 8.5-9 biasanya digunakan untuk pelekapan.
Keperluan penyediaan sampel rutin:
1. Pemilihan pewarna
Oleh kerana mikroskop confocal menggunakan laser panjang gelombang tunggal sebagai sumber cahaya, pilihan pewarna pendarfluor harus berdasarkan panjang gelombang laser yang dilengkapi dengan mikroskop confocal. Jika terdapat berbilang pewarna pendarfluor dalam sampel yang sama, panjang gelombang pancaran mereka juga harus dipertimbangkan sebanyak mungkin. Jangan bertindih untuk mengelakkan masalah silang warna.
2. Pemilihan pembawa sampel
Secara amnya, kanta objektif berkuasa tinggi mikroskop confocal ialah kanta minyak, apertur berangkanya kecil, dan jarak kerja antara kanta dan sampel dikehendaki tidak lebih daripada 0.17mm. Slaid dan slip penutup adalah baik. Jika ia adalah sel terampai atau zarah terampai, hidangan petri khusus untuk mikroskop confocal boleh digunakan untuk membawa sampel untuk pemerhatian.
3. Pemilihan medium pelekap
Jika sampel hanya perlu diperhatikan sekali sahaja dan pendarfluor tidak mudah dipadamkan, anda boleh memilih kepekatan campuran gliserol tertentu untuk mengelak slaid. Jika sampel perlu diletakkan untuk tempoh masa dan diambil beberapa kali, medium pelekap pelindapkejut anti-pendarfluor harus dipilih untuk mengurangkan kehilangan isyarat pendarfluor.
