Teknik pewarnaan dan pemerhatian mikroskopik mikroorganisma
Pewarnaan Mudah Bakteria
1 Objektif
1.1 Untuk mempelajari teknik asas calitan dan pewarnaan mikrob.
1.2 Untuk menguasai kaedah pewarnaan mudah bakteria.
1.3 Untuk mengetahui ciri-ciri morfologi bakteria, dan untuk menyatukan pembelajaran penggunaan cermin minyak dan teknik operasi aseptik.
2 Prinsip Calitan dan pewarnaan bakteria adalah teknik asas dalam eksperimen mikrobiologi. Sel-sel bakteria adalah kecil dan telus, ia tidak mudah dikenali di bawah mikroskop cahaya biasa, dan ia mesti diwarnakan. Penggunaan pewarna tunggal untuk mengotorkan bakteria, supaya organisma bernoda dan latar belakang membentuk perbezaan warna yang jelas, supaya morfologi dan strukturnya dapat diperhatikan dengan lebih jelas. Kaedah ini mudah dilakukan dan sesuai untuk pemerhatian bentuk umum organisma dan susunan bakteria. Pewarna alkali biasanya digunakan untuk pewarnaan mudah, kerana dalam larutan neutral, beralkali atau berasid lemah, sel bakteria biasanya bercas negatif, dan apabila pewarna alkali diionkan, bahagian pewarnaan molekulnya bercas positif, jadi bahagian pewarnaan pewarna alkali. boleh mengikat bakteria dengan mudah untuk menjadikan bakteria berwarna. Sel-sel bakteria yang diwarnai berkontras secara mendadak dengan latar belakang dan lebih mudah untuk dikenali di bawah mikroskop. Pewarna yang biasa digunakan untuk pewarnaan mudah termasuk biru merocyanine, ungu kristal, dan merah kompaun asas. Apabila penguraian bakteria gula untuk menghasilkan asid supaya pH medium berkurangan, caj positif bakteria meningkat, dan kemudian boleh digunakan dalam pewarna merah, merah berasid atau merah Congo dan pewarna berasid lain. Bakteria mesti diperbaiki sebelum mengotorkan. Tujuannya adalah dua kali ganda: satu adalah untuk membunuh bakteria dan membuat bakteria mematuhi slaid; yang kedua ialah untuk meningkatkan pertaliannya dengan pewarna. Dua kaedah biasa digunakan: pemanasan dan penetapan kimia. Cuba kekalkan morfologi asal sel semasa membetulkan.
3 Bahan
3.1 Terikan Bacillus subtilis 12-18h kultur senget agar nutrient, Staphylococcus aureus kira-kira 24j kultur senget agar nutrien, Escherichia coli 24h kultur agar agar nutrien, kultur senget agar yis baker.
3.2 Pewarnaan pewarnaan biru metilena alkali Lue (atau pewarnaan ungu kristal ammonium oksalat), pewarna merah sebatian asid karbolik.
3.3 Instrumen atau peralatan lain Mikroskop, lampu alkohol, slaid, gelang inokulasi, pemegang slaid, botol dua lapis (diisi dengan minyak cedar dan xilena), kertas mikroskop, garam fisiologi atau air suling, dsb.
4 Prosedur Calitan → pengeringan → penetapan → pewarnaan → basuhan → pengeringan → pemeriksaan mikroskopik.
5 Langkah
5.1 sapuan Ambil dua slaid bersih dan bebas minyak, masing-masing dengan titisan kecil garam (atau air suling) di tengah slaid dalam keadaan aseptik, dengan cincin inokulasi untuk beroperasi secara aseptik, masing-masing, daripada Bacillus subtilis, Garcinia micrococcus dan Escherichia coli condong untuk memetik sedikit lumut dalam titisan air, dicampur dan disalut dengan filem. Jika penggantungan bakteria (atau kultur cecair) calitan, boleh digunakan untuk menyuntik cincin pilih 2 hingga 3 cincin terus pada slaid. Perhatikan bahawa garam (air suling) dan mengambil bakteria tidak boleh terlalu banyak dan merebak secara merata, tidak terlalu tebal.
5.2 Pengeringan Keringkan secara semula jadi pada suhu bilik. Ia juga boleh dikeringkan dengan memanaskan sedikit di atas lampu alkohol dengan bahagian bersalut di atas. Walau bagaimanapun, jangan terlalu dekat dengan nyalaan, kerana suhu yang terlalu tinggi akan memusnahkan morfologi bakteria.
5.3 Penetapan Jika pengeringan haba digunakan, penetapan dan pengeringan digabungkan menjadi satu langkah dengan cara yang sama seperti pengeringan. Calit, keringkan dan betulkan haba.
5.4 Pewarnaan Letakkan slaid rata di atas rak slaid, tambah 1 hingga 2 titis larutan pewarna pada smear (larutan pewarnaan hanya menutup filem smear adalah sesuai). Warnakan sapuan dengan Lü's Basic Mellanox Blue selama 1~2min, dan dengan Karbonat Merah (atau Ammonium Oxalate Crystal Violet) selama kira-kira 1min.
5.5 Membilas Tuangkan larutan pewarna dan bilas perlahan-lahan dengan air paip dari satu hujung slaid sehingga air yang mengalir turun dari sapuan tidak berwarna. Semasa membilas, jangan biarkan air mengalir terus untuk mencuci permukaan bersalut. Aliran air tidak boleh terlalu deras atau terlalu besar untuk mengelakkan filem smear tercabut.
5.6 Pengeringan Goncangkan titisan air pada gelongsor untuk kering secara semula jadi, tiup kering atau kertas penyerap boleh digunakan untuk menyerap kering (berhati-hati agar tidak mengelap badan bakteria). 5.7 Pemeriksaan mikroskopik Smear dikeringkan dan diperiksa dengan mikroskop. Calitan mesti kering sepenuhnya sebelum ia boleh diperhatikan dengan mikroskop minyak.
6 Keputusan Lukiskan morfologi E. coli dan Micrococcus garciniae selepas pewarnaan tunggal.
Pewarna Gram
1 Tujuan
1.1 Untuk memahami prinsip pewarnaan Gram dan kepentingannya dalam pengelasan dan pengenalpastian bakteria.
1.2 Untuk mempelajari dan menguasai teknik pewarnaan Gram dan untuk menyatukan pembelajaran penggunaan kanta minyak mikroskop cahaya.
