Struktur dan komponen utama mikroskop pendarfluor
Mikroskopi pendarfluor ialah alat penting dalam sitokimia imunofluoresen. Ia terdiri daripada komponen utama seperti sumber cahaya, sistem plat penapis dan sistem optik. Ia adalah untuk menggunakan panjang gelombang cahaya tertentu untuk merangsang spesimen untuk mengeluarkan pendarfluor, dan untuk memerhati imej pendarfluor spesimen dengan menguatkan kanta objektif dan sistem kanta mata.
Struktur dan komponen utama mikroskop pendarfluor
(1) Sumber cahaya
Pada masa kini, lampu merkuri tekanan ultra tinggi 200W sering digunakan sebagai sumber cahaya. Mereka diperbuat daripada kaca kuarza, dengan bentuk sfera di tengah, dan sejumlah merkuri diisi di dalamnya. Semasa kerja, pelepasan antara dua elektrod menyebabkan merkuri menyejat, dan tekanan udara dalam bola meningkat dengan cepat. Apabila merkuri tersejat sepenuhnya, ia boleh mencapai 50-70 tekanan atmosfera standard, dan proses ini biasanya mengambil masa kira-kira 5-15 minit. Pencahayaan lampu merkuri tekanan ultra tinggi adalah hasil daripada pancaran kuanta cahaya semasa penceraian berterusan dan pengurangan molekul merkuri oleh pelepasan antara elektrod. Ia memancarkan cahaya ultraungu dan biru-ungu yang kuat, yang cukup untuk merangsang pelbagai bahan pendarfluor, jadi ia digunakan secara meluas dalam mikroskop pendarfluor.
Lampu merkuri tekanan ultra tinggi juga mengeluarkan banyak haba. Oleh itu, rumah lampu mesti mempunyai keadaan pelesapan haba yang baik, dan suhu persekitaran kerja tidak boleh terlalu tinggi.
Lampu merkuri tekanan ultra tinggi baharu boleh dinyalakan tanpa voltan tinggi pada permulaan penggunaan. Selepas tempoh penggunaan, ia perlu dimulakan pada voltan tinggi (kira-kira 15000V). Selepas dimulakan, voltan kerja penyelenggaraan biasanya 50-60V, dan arus kerja ialah kira-kira 4A. Purata jangka hayat lampu merkuri tekanan ultra tinggi 200W adalah kira-kira 200 jam jika ia digunakan selama 2 jam setiap kali. Lebih pendek masa bekerja, lebih pendek jangka hayat. Jika ia hanya digunakan selama 20 minit, jangka hayat akan dikurangkan sebanyak 50 peratus . Oleh itu, kurangkan bilangan permulaan apabila menggunakannya. Semasa penggunaan mentol, keberkesanan bercahayanya berkurangan secara beransur-ansur. Selepas lampu padam, tunggu sehingga ia sejuk sebelum dimulakan semula. Jangan matikan mentol sejurus selepas menyalakannya, supaya tidak merosakkan elektrod akibat penyejatan merkuri yang tidak lengkap. Secara amnya, ia perlu menunggu selama 15 minit. Oleh kerana tekanan tinggi lampu merkuri tekanan ultra tinggi dan sinaran ultraungu yang kuat, mentol mesti diletakkan di dalam ruang lampu sebelum ia boleh dinyalakan, supaya tidak merosakkan mata dan menyebabkan operasi sekiranya berlaku letupan. .
Litar sumber cahaya lampu merkuri tekanan ultra tinggi (100W atau 200W) dan beberapa bahagian termasuk pengubah, balast dan permulaan. Terdapat sistem untuk melaraskan pusat bercahaya mentol dalam ruang lampu. Reflektor cekung bersalut aluminium dipasang di belakang mentol, dan kanta pengumpul cahaya dipasang di hadapan.
Lampu merkuri tekanan ultra tinggi domestik GCQ-200 mempunyai prestasi yang baik dan boleh menggantikan mentol yang diimport seperti HBO-200. Purata jangka hayat adalah lebih daripada 200j dan harganya agak rendah.
Peranti sumber cahaya pendarfluor bromin tungsten suhu warna tinggi yang ringkas dan mudah alih yang dibangunkan di negara saya mempunyai saiz kecil, ringan, kuasa rendah, penggunaan dwi AC dan DC (dengan bekalan kuasa DC), mudah dibawa, mudah digunakan, dan mempunyai telah dipopularkan dan diterapkan.
(2) Sistem penapis warna
Sistem penapis warna adalah bahagian penting dalam mikroskop pendarfluor, yang terdiri daripada plat penapis pengujaan dan plat penapis menekan. Model plat penapis dan nama setiap pengeluar selalunya tidak seragam. Plat penapis biasanya dinamakan sempena warna asas, huruf di hadapan mewakili warna, huruf di belakang mewakili kaca, dan nombor mewakili ciri model. mikroskop olympus
(3) Kanta objektif
Pelbagai kanta objektif boleh digunakan, tetapi kanta objektif akromatik digunakan kerana autofluoresensinya adalah minimum dan sifat penghantaran cahayanya (julat panjang gelombang) sesuai untuk pendarfluor. Oleh kerana kecerahan pendarfluor imej dalam bidang pandangan mikroskop adalah berkadar dengan segi empat sama nisbah apertur kanta objektif dan berkadar songsang dengan pembesarannya, untuk meningkatkan kecerahan imej pendarfluor, kanta objektif dengan saiz besar. nisbah apertur harus digunakan. Terutama pada pembesaran tinggi kesannya sangat jelas. Oleh itu, untuk spesimen dengan pendarfluor yang tidak mencukupi, kanta objektif dengan nisbah apertur yang besar harus digunakan dengan kanta mata serendah mungkin (4×, 5×, 6.3×, dsb.).
(4) Cermin
Lapisan reflektif reflektor biasanya bersalut aluminium, kerana aluminium menyerap kurang di rantau biru-ungu cahaya ultraviolet dan cahaya yang boleh dilihat, dan pantulan adalah lebih daripada 90 peratus, manakala pantulan perak hanya 70 peratus. Secara amnya, reflektor rata digunakan.
(5) Pemeluwap
Pemeluwap yang direka untuk mikroskop pendarfluor diperbuat daripada kaca kuarza atau kaca telus UV yang lain. Terdapat dua jenis pemeluwap medan jelas dan pemeluwap medan gelap. Terdapat juga penumpu pendarfluor kontras fasa.
(6) Peranti epi-cahaya
Jenis baru peranti epi-cahaya ialah selepas cahaya dari sumber cahaya mencecah penapis spektroskopi gangguan, bahagian panjang gelombang pendek (ultraviolet dan biru ungu) dipantulkan kerana sifat salutan pada penapis. Apabila penapis menghadap sumber cahaya, sudutnya ialah 45. Apabila ia dicondongkan, ia menembak ke kanta objektif secara menegak, dan menembak ke spesimen melalui kanta objektif, supaya spesimen teruja. Pada masa ini, kanta objektif secara langsung bertindak sebagai pengumpul cahaya. Pada masa yang sama, bahagian panjang penapis (hijau, kuning, merah, dll.) Telus kepada penapis, jadi ia tidak mencerminkan arah kanta objektif, dan penapis bertindak sebagai plat penapis pengujaan, kerana pendarfluor spesimen berada di kawasan panjang gelombang cahaya yang boleh dilihat, boleh melalui penapis dan mencapai kanta mata untuk pemerhatian, kecerahan imej pendarfluor meningkat dengan peningkatan pembesaran, dan lebih kuat daripada cahaya yang dihantar. sumber pada pembesaran tinggi. Sebagai tambahan kepada fungsi sumber cahaya penghantaran, ia lebih sesuai untuk pemerhatian langsung spesimen legap dan lut sinar, seperti kepingan tebal, membran penapis, koloni, dan spesimen kultur tisu. Mikroskop pendarfluor baharu yang dibangunkan dalam beberapa tahun kebelakangan ini kebanyakannya menggunakan peranti epi-cahaya, yang dipanggil mikroskop pendarfluor epi.
