Perbezaan Antara Mikroskop Pendarfluor dan Mikroskop Cahaya Biasa
Mikroskop pendarfluor berbeza daripada mikroskop optik konvensional. Daripada memerhati spesimen dengan cahaya daripada sumber cahaya biasa, mereka menggunakan cahaya dengan panjang gelombang tertentu (biasanya cahaya ultraungu atau biru-ungu) untuk mengujakan bahan pendarfluor dalam spesimen pada slaid mikroskop, menyebabkan bahan ini mengeluarkan pendarfluor. Oleh itu, sumber cahaya mikroskop pendarfluor tidak menerangi spesimen secara langsung; ia bertindak sebagai sumber tenaga untuk merangsang bahan pendarfluor endogen dalam spesimen. Kita boleh melihat spesimen bukan kerana pencahayaan daripada sumber cahaya itu sendiri, tetapi kerana bahan pendarfluor di dalam spesimen menyerap tenaga cahaya pengujaan dan kemudian mengeluarkan pendarfluor.
Ia berikutan bahawa ciri utama mikroskop pendarfluor ialah sumber cahayanya boleh membekalkan cahaya pengujaan bagi jalur panjang gelombang tertentu, membolehkan bahan pendarfluor dalam spesimen yang diperiksa mengeluarkan pendarfluor dengan keamatan yang mencukupi. Sementara itu, mikroskop pendarfluor mesti dilengkapi dengan sistem penapis yang sepadan. Ia adalah instrumen penting untuk histokimia pendarfluor. Mikroskop pendarfluor terutamanya terdiri daripada sumber cahaya tekanan ultra tinggi, sistem penapis (termasuk penapis pengujaan dan penapis penghalang), sistem optik dan sistem fotografi. Ia berfungsi dengan menggunakan cahaya dengan panjang gelombang tertentu untuk merangsang bahan pendarfluor.
① Kaedah Pengujaan PendarfluorMenurut julat panjang gelombang cahaya pengujaan, terdapat dua jenis: kaedah pengujaan UV (kaedah pencahayaan ultraungu) dan kaedah pengujaan BV (kaedah pencahayaan biru-ungu).Kaedah pengujaan UV menggunakan cahaya ultraviolet yang lebih pendek daripada 400 nm untuk pengujaan. Ia menjana pendarfluor yang tidak kelihatan, jadi pendarfluor yang diperhatikan berasal daripada spesimen itu sendiri. Kaedah ini dengan mudah membezakan pendarfluor khusus daripada autofluoresensi latar belakang.
② Kaedah Pengujaan BV Kaedah pengujaan BV menggunakan cahaya pengujaan daripada ungu hingga biru berpusat pada 404 nm dan 434 nm. Memandangkan cahaya biru digunakan untuk menyinari spesimen, sistem penapis pengujaan untuk kaedah ini mesti menyekat sepenuhnya cahaya biru dan hanya membenarkan cahaya hijau dan kuning yang diperlukan melaluinya.Untuk pewarnaan antibodi pendarfluor, panjang gelombang penyerapan maksimum cahaya pengujaan adalah hampir dengan panjang gelombang pancaran maksimum pewarna pendarfluor. Atas sebab ini, set penapis untuk pengujaan BV mesti menggunakan penapis penghalang potong. Kaedah ini menggunakan cahaya biru untuk pengujaan, jadi kecekapan pengumpulan pendarfluor adalah agak tinggi dan imej yang lebih terang boleh diperolehi. Kelemahannya ialah pendarfluor melebihi 500 nm tidak dapat dikesan, dan hanya imej kuning-hijau boleh dilihat melebihi 500 nm. Dalam pewarnaan antibodi pendarfluor, pertimbangan kekhususan sangat bergantung pada maklumat warna, jadi kelemahan kaedah pengujaan BV boleh menjadi had utama apabila membincangkan kekhususan halus.
