Dua Kaedah Pemerhatian Mikroskop Biasa
1. Pemerhatian medan gelap
Pemerhatian medan gelap menggunakan pencahayaan medan gelap. Tidak seperti pemerhatian medan terang, cahaya yang menerangi tidak dilihat secara langsung; hanya cahaya yang dipantulkan atau dibelaukan oleh spesimen yang dikesan. Akibatnya, medan pandangan mempunyai latar belakang gelap manakala spesimen kelihatan cerah.
Pemerhatian medan gelap adalah berdasarkan kesan Tyndall dalam optik. Zarah-zarah habuk tidak dapat dilihat oleh mata manusia di bawah cahaya intens langsung disebabkan oleh pembelauan cahaya. Apabila cahaya mengenai zarah secara serong, pantulan cahaya menjadikan zarah kelihatan membesar dan kelihatan.
Aksesori khas yang diperlukan untuk pemerhatian medan gelap ialah pemeluwap medan gelap. Ia menghalang pancaran cahaya daripada melepasi secara menegak ke atas melalui spesimen. Sebaliknya, ia mengubah hala cahaya untuk menerangi spesimen pada sudut serong. Cahaya yang menerangi tidak memasuki kanta objektif secara langsung, dan imej terang terbentuk oleh cahaya yang dipantulkan dan difraksi dari permukaan spesimen. Resolusi pemerhatian medan gelap jauh lebih tinggi daripada pemerhatian medan terang, mencapai 0.02–0.004 μm.
2. Mikroskopi kontras fasa
Dalam pembangunan mikroskop optik, ciptaan mikroskopi kontras fasa mewakili pencapaian besar dalam mikroskop moden. Mata manusia hanya boleh membezakan panjang gelombang (warna) dan amplitud (kecerahan) gelombang cahaya. Untuk spesimen biologi yang tidak berwarna dan lutsinar, cahaya melalui dengan sedikit perubahan dalam panjang gelombang atau amplitud, menjadikannya sukar untuk diperhatikan dalam keadaan medan terang.
Mikroskopi kontras fasa melakukan pemeriksaan berdasarkan perbezaan laluan optik spesimen. Ia secara berkesan menggunakan gangguan cahaya untuk menukar perbezaan fasa (tidak dapat dilihat oleh mata manusia) kepada perbezaan amplitud yang boleh dibezakan. Malah bahan lutsinar tidak berwarna boleh dilihat dengan jelas. Ini sangat memudahkan pemerhatian sel hidup, jadi mikroskop fasa kontras digunakan secara meluas dengan mikroskop terbalik.
Prinsip asas mikroskop kontras fasa adalah untuk menukar perbezaan laluan optik cahaya nampak yang dihantar melalui spesimen kepada perbezaan amplitud, dengan itu meningkatkan kontras antara struktur yang berbeza dan menjadikannya kelihatan jelas. Selepas melalui spesimen, cahaya membias, menyimpang dari laluan asalnya dan terencat 1/4 daripada panjang gelombang. Keterlambatan tambahan atau pendahuluan 1/4 panjang gelombang menghasilkan jumlah perbezaan laluan optik sebanyak 1/2 panjang gelombang. Kedua-dua rasuk ditindih dan mengganggu, meningkatkan atau mengurangkan amplitud untuk meningkatkan kontras. Dari segi struktur, mikroskop kontras fasa mempunyai dua ciri khas yang membezakannya daripada mikroskop optik biasa.
