Pengukuran Kuantiti Mikrob - Kaedah Pengiraan Terus Mikroskopik!
Pertumbuhan populasi bakteria dicirikan oleh pertambahan bilangan sel atau pertambahan bahan selular. Terdapat beberapa kaedah untuk mengukur nombor sel, termasuk kiraan mikroskopik langsung, kiraan plat, turbometri dengan spektrofotometer, nombor paling berkemungkinan MPN, dan penapisan membran. Kaedah untuk mengukur bahan selular termasuk mengukur berat kering sel, mengukur kandungan komponen sel tertentu seperti nitrogen, RNA dan DNA, dan mengukur produk metabolik. Secara ringkasnya, terdapat banyak kaedah untuk mengukur pertumbuhan mikrob, masing-masing mempunyai kelebihan dan kekurangannya sendiri, dan pemilihan harus berdasarkan keperluan khusus dalam kerja. Percubaan ini terutamanya memperkenalkan kaedah pengiraan langsung mikroskop yang biasa digunakan dalam kerja pengeluaran dan penyelidikan saintifik.
Keperluan tujuan
1. Jelaskan prinsip menggunakan papan pengiraan sel darah untuk mengira.
2. Menguasai kaedah menggunakan papan pengiraan sel darah untuk pengiraan mikrob.
2, Prinsip Asas
Kaedah pengiraan langsung mikroskopik ialah kaedah yang mudah, pantas dan intuitif untuk mengira secara langsung sejumlah kecil ampaian sampel di bawah mikroskop dengan meletakkannya di atas slaid kaca khas dengan kawasan dan isipadu tertentu (juga dikenali sebagai pembilang bakteria). Pada masa ini, peranti pengiraan bakteria yang biasa digunakan di dalam dan luar negara termasuk plat pengiraan sel darah, peranti pengiraan bakteria Peteroff Hauser, dan peranti pengiraan bakteria Hawksley, yang kesemuanya boleh digunakan untuk mengira penggantungan yis, bakteria, spora kulat, dsb., dengan prinsip asas yang sama. Dua jenis pembilang bakteria yang terakhir mempunyai jumlah isipadu {{0}}.02mm3 selepas ditutup dengan kaca penutup, dan jarak antara kaca penutup dan slaid pembawa hanya 0.02mm. Oleh itu, objektif rendaman minyak boleh digunakan untuk memerhati dan mengira sel yang lebih kecil seperti bakteria. Di samping menggunakan pembilang bakteria ini, terdapat juga kaedah anggaran untuk memerhatikan secara langsung nisbah kawasan smear kepada kawasan lapang di bawah mikroskop, yang biasanya digunakan untuk pemeriksaan bakteriologi susu. Kelebihan pengiraan terus dengan mikroskop adalah intuitif, cepat dan mudah dikendalikan. Tetapi kelemahan kaedah ini ialah hasil yang diukur biasanya jumlah sel mati dan hidup. Pada masa ini, terdapat beberapa kaedah yang boleh mengatasi kelemahan ini, seperti menggabungkan budaya ruang pewarnaan sel hidup (masa yang singkat) dan menambah perencat pembahagian sel untuk mencapai matlamat hanya mengira sel hidup.
Menggunakan papan pengiraan sel darah sebagai contoh pengiraan terus di bawah mikroskop. Kaedah penggunaan dua pembilang bakteria yang lain boleh didapati dalam manual pelbagai pengeluar. Pengiraan terus di bawah mikroskop menggunakan plat pengiraan sel darah ialah kaedah yang biasa digunakan untuk pengiraan mikrob. Papan pengiraan adalah slaid kaca yang dibuat khas dengan empat alur membentuk tiga platform di atasnya; Platform yang lebih luas di tengah dibahagikan kepada dua bahagian dengan alur mendatar pendek, dan terdapat grid pada setiap sisi platform. Setiap grid dibahagikan kepada sembilan grid besar, dan grid besar di tengah ialah bilik mengira. Struktur plat pengiraan sel darah ditunjukkan dalam Rajah l{{0}}. Skala bilik mengira biasanya mempunyai dua spesifikasi. Satu ialah segi empat sama besar dibahagikan kepada 25 petak tengah, dan setiap petak dibahagikan lagi kepada 16 petak kecil (Rajah 15-2); Kaedah lain ialah membahagikan petak besar kepada 16 petak tengah, dan setiap petak dibahagikan lagi kepada 25 petak kecil. Walau bagaimanapun, tanpa mengira saiz papan pengiraan, terdapat 400 petak kecil dalam setiap petak besar. Jika panjang sisi setiap segi empat sama ialah 1mm, luas setiap segi empat sama besar ialah lmm2. Selepas ditutup dengan kaca penutup, ketinggian antara kaca penutup dan slaid ialah 0.1mm, jadi isipadu bilik kiraan ialah 0.1mm3 (seperseribu mililiter). Rajah 15-1 Struktur Papan Kira Sel Darah (I) Rajah 15-2 Struktur Papan Kira Sel Darah (II) Pandangan hadapan; B. Pandangan bahagian menegak; Grid yang diperbesarkan mempunyai segi empat sama besar di tengah sebagai ruang pengiraan 1. Papan pengiraan sel darah; 2. Kaca penutup; Apabila mengira di dalam bilik pengiraan, jumlah kiraan bakteria biasanya dikira untuk lima petak, maka nilai purata setiap petak diperolehi, didarab dengan 25 atau 16 untuk mendapatkan jumlah bilangan bakteria dalam petak besar, yang kemudiannya ditukar kepada jumlah kiraan bakteria dalam larutan bakteria lml. Dengan mengandaikan jumlah bilangan bakteria dalam lima grid persegi ialah A dan faktor pencairan larutan bakteria ialah B. Jika terdapat 25 plat pengiraan dalam grid persegi, jumlah kiraan bakteria dalam 1mL larutan bakteria ialah A/5 × 25 × 104 × B=50000A · B. Begitu juga, jika terdapat 16 plat pengiraan dalam grid segi empat sama, jumlah kiraan bakteria dalam 1mL larutan bakteria ialah A/5 × 16 × 104 × B=32000A · B
